Hibridação de southern usando sondas não radioactivas

28 outubro 2008, 08:30 • Miguel Nobre Parreira Cacho Teixeira

Separação e visualização de um produto de PCR em gel de agarose. Purificação do fragmento pretendido a partir do gel.

Separação e visualização de DNA cromossómico de S. elodea ATCC 31461, hidrolisado com 4 enzimas de restrição, em gel de agarose. Depurinação, desnaturação e neutralização do DNA no gel de agarose. Transferência por capilaridade do DNA cromossómico do gel para uma membrana de nylon.

Hibridação de southern usando sondas não radioactivas

27 outubro 2008, 08:00 • Miguel Nobre Parreira Cacho Teixeira

Separação e visualização de um produto de PCR em gel de agarose. Purificação do fragmento pretendido a partir do gel.

Separação e visualização de DNA cromossómico de S. elodea ATCC 31461, hidrolisado com 4 enzimas de restrição, em gel de agarose. Depurinação, desnaturação e neutralização do DNA no gel de agarose. Transferência por capilaridade do DNA cromossómico do gel para uma membrana de nylon.

Não houve aula

23 outubro 2008, 14:30 • Leonilde Morais Moreira

Não foi possível leccionar esta aula devido ao facto de a Torre Sul (onde a aula se realizava) ter sido evacuada.

A2- Amplificação por PCR do gene pgmG de Spingomonas elodea

22 outubro 2008, 08:00 • Leonilde Morais Moreira

Amplificação de um fragmento interno do gene pgmG de Sphingomonas elodea por recurso à técnica de PCR.

Restrição do DNA cromossómico de S. elodea por BamHI, EcoRI, HindIII e PstI.

Utlização de várias ferramentas disponíveis na web para análise de sequências de DNA e proteínas (mapa de restrição, escolha de iniciadores, pesquisa de ORFs, pesquisa de motivos conservados, topologia de proteínas, alinhamentos simples e múltiplos, obtenção de modelos tridimensionais para proteínas).

Hibridação de ácidos nucleicos

21 outubro 2008, 15:30 • Leonilde Morais Moreira

Hibridação de Southern, hibridação em colónia e hibridação "dot blot". Descreveu-se a metodologia de transferência de ácidos nucleicos por capilaridade (Southern blotting) e sua fixação em membranas de nitrocelulose ou nylon. Descreveu-se um métodos para marcação de sondas de DNA ("primer extension") bem como a sua marcação com nucleótidos radioactivos ( 32P) ou a frio.

Exemplos de aplicação dos vários tipos de hibridação DNA-DNA. Uso da hibridação em colónia com vista a procurar clones, entre os múltiplos clones de um banco genómico, em que a inserção é homóloga da sonda seleccionada para o efeito.