Hibridação de Southern utilizando sondas não radioactivas - 2ªparte

10 novembro 2008, 08:00 • Miguel Nobre Parreira Cacho Teixeira

Pré-hibridação e Hibridação do DNA na membrana de nitrocelulose com as sondas preparadas na aula anterior. Lavagens restringentes. Detecção dos sinais de hibridação por ligação de um anticorpo para fluoresceína associado ao grupo repórter Fosfatase alcalina.

Técnicas para o estudo da expressão genética

6 novembro 2008, 14:30 • Leonilde Morais Moreira

A hibridação de Northern - discutiu-se a aplicação da hibridação de Northern em estudos de regulação da expressão genética a nível transcricional. Mostrou-se ainda como é possível, com base em experiências de Northern blotting, determinar o tamanho e demonstrar a presença de transcritos policistrónicos, no caso da transcrição de operões em células bacterianas.

Nuclease protection assay- analisou-se brevemente a utilização desta técnica para a quantificação de transcritos.

PCR quantitativo em tempo Real-discutiram-se os princípios teóricos da técnica de PCR em tempo real e deram-se exemplos de utilização de sondas fluorescentes como TaqMan e Molecular Beacon.

Hibridação de southern usando sondas não radioactivas

5 novembro 2008, 08:00 • Miguel Nobre Parreira Cacho Teixeira

Separação e visualização de um produto de PCR em gel de agarose. Purificação do fragmento pretendido a partir do gel.

Separação e visualização de DNA cromossómico de S. elodea ATCC 31461, hidrolisado com 4 enzimas de restrição, em gel de agarose. Depurinação, desnaturação e neutralização do DNA no gel de agarose. Transferência por capilaridade do DNA cromossómico do gel para uma membrana de nylon.

RNA de interferência e mutagénese dirigida

4 novembro 2008, 15:30 • Leonilde Morais Moreira

Eliminação de genes por recurso a cassetes de eliminação para a obtenção de mutantes em levedura. Discussão de aspectos a ter em atenção para o sucesso do processo.

Foi explicada a técnica de RNA de interferência para o silenciamento de genes em eucariotas.

Foram apresentados os fundamentos e as técnicas usadas para obter um gene/fragmento de DNA alterado em resultado de mutagénese dirigida e para seleccionar os clones de interesse.

Hibridação de southern usando sondas não radioactivas

4 novembro 2008, 08:30 • Leonilde Morais Moreira

Separação e visualização de um produto de PCR em gel de agarose. Purificação do fragmento pretendido a partir do gel.

Separação e visualização de DNA cromossómico de S. elodea ATCC 31461, hidrolisado com 4 enzimas de restrição, em gel de agarose. Depurinação, desnaturação e neutralização do DNA no gel de agarose. Transferência por capilaridade do DNA cromossómico do gel para uma membrana de nylon.