Vectores de clonagem para procariotas

14 outubro 2008, 15:30 • Leonilde Morais Moreira

Foram discutidas as características dos vectores de clonagem baseados em plasmídeos ou fagos. Concretamente, analisaram-se as vantagens da utilização complementar de vectores com 2 marcas de selecção, com vista à identificação dos clones de interesse por inactivação de uma das marcas (um gene de resistência a antibiótico ou o gene lacZ). Exemplificou-se a utilização de cosmídeos para construção de bancos genómicos.

A2- Amplificação por PCR do gene pgmG de Spingomonas elodea

14 outubro 2008, 08:30 • Leonilde Morais Moreira

Amplificação de um fragmento interno do gene pgmG de Sphingomonas elodea por recurso à técnica de PCR.

Restrição do DNA cromossómico de S. elodea por BamHI, EcoRI, HindIII e PstI.

Utlização de várias ferramentas disponíveis na web para análise de sequências de DNA e proteínas (mapa de restrição, escolha de iniciadores, pesquisa de ORFs, pesquisa de motivos conservados, topologia de proteínas, alinhamentos simples e múltiplos, obtenção de modelos tridimensionais para proteínas).

A2- Amplificação por PCR do gene pgmG de Spingomonas elodea

13 outubro 2008, 08:00 • Leonilde Morais Moreira

Amplificação de um fragmento interno do gene pgmG de Sphingomonas elodea por recurso à técnica de PCR.

Restrição do DNA cromossómico de S. elodea por BamHI, EcoRI, HindIII e PstI.

Utlização de várias ferramentas disponíveis na web para análise de sequências de DNA e proteínas (mapa de restrição, escolha de iniciadores, pesquisa de ORFs, pesquisa de motivos conservados, topologia de proteínas, alinhamentos simples e múltiplos, obtenção de modelos tridimensionais para proteínas).

Reaçcão em cadeia da polimerase (PCR)

9 outubro 2008, 14:30 • Leonilde Morais Moreira

Discutiram-se os aspectos a ter em conta no desenho de iniciadores (primers) para amplificação por PCR. Justificou-se a necessidade de usar primers degenerados em situações particulares. Discutiu-se o conceito de primers híbridos e sua aplicação na introdução de locais de reconhecimento para uma determinada enzima de restrição no fragmento de DNA a amplificar para clonagem.

A1-Introdução de plasmídeos em bactérias por conjugação

8 outubro 2008, 08:00 • Leonilde Morais Moreira

Este trabalho laboratorial envolveu a transferência de DNA plasmídico de E. coli para Pseudomonas aeruginosa, utlizando para tal a técnica de conjugação triparental.