TP3- Hibridação de Southern utilizando sondas não radioactivas

7 novembro 2007, 08:00 • Leonilde Morais Moreira

Procedeu-se à separação dos vários DNAs de Sphingomonas elodea digeridos com BamHI, EcoRI, HIndIII e PstI e transferiram-se, por capilaridade, os fragmentos para uma membrana de nylon.

Visualizou-se o produto de PCR obtido na aula anterior e purificou-se a partir do gel de agarose usando um kit comercial.

Técnicas para o estudo da expressão genética

6 novembro 2007, 15:30 • Leonilde Morais Moreira

A hibridação de Northern - discutiu-se a aplicação da hibridação de Northern em estudos de regulação da expressão genética a nível transcricional. Mostrou-se ainda como é possível, com base em experiências de Northern blotting, determinar o tamanho e demonstrar a presença de transcritos policistrónicos, no caso da transcrição de operões em células bacterianas.

Construção e uso de fusões lacZ- analisou-se o modo de construir fusões genéticas entre a região promotora de um determinado gene, cuja expressão genética no seu hospedeiro se pretende estudar, e um gene reporter. Foi exemplificado o uso do gene reporter ser o gene lacZ.

Nuclease protection assay- analisou-se brevemente a utilização desta técnica para a quantificação de transcritos.

PCR quantitativo em tempo Real-discutiram-se os princípios teóricos da técnica de PCR em tempo real e deram-se exemplos de utilização de sondas fluorescentes como TaqMan e Molecular Beacon.

No final foram discutidas as vantagens e limitaçóes das 4 técnicas, conforme o tipo de estudo que se pretena realizar.

TP3- Hibridação de Southern utilizando sondas não radioactivas

6 novembro 2007, 08:00 • Leonilde Morais Moreira

Procedeu-se à separação dos vários DNAs de Sphingomonas elodea digeridos com BamHI, EcoRI, HIndIII e PstI e transferiram-se, por capilaridade, os fragmentos para uma membrana de nylon.

Visualizou-se o produto de PCR obtido na aula anterior e purificou-se a partir do gel de agarose usando um kit comercial.

TP3- Hibridação de Southern utilizando sondas não radioactivas

5 novembro 2007, 08:00 • Leonilde Morais Moreira

Procedeu-se à separação dos vários DNAs de Sphingomonas elodea digeridos com BamHI, EcoRI, HIndIII e PstI e transferiram-se, por capilaridade, os fragmentos para uma membrana de nylon.

Visualizou-se o produto de PCR obtido na aula anterior e purificou-se a partir do gel de agarose usando um kit comercial.

RNA de interferência e mutagénese dirigida

30 outubro 2007, 15:30 • Leonilde Morais Moreira

Foi explicada a técnica de RNA de interferência para o silenciamento de genes em eucariotas.

Foram apresentados os fundamentos e as técnicas usadas para obter um gene/fragmento de DNA alterado em resultado de mutagénese dirigida e para seleccionar os clones de interesse. Foi salientada a importância da mutagénese dirigida em Biotecnologia e na investigação em Biologia.