TP2- Amplificação por PCR do gene pgmG de Spingomonas elodea

15 outubro 2007, 08:00 • Leonilde Morais Moreira

Amplificação de um fragmento interno do gene pgmG de Sphingomonas elodea por recurso à técnica de PCR.

Restrição do DNA cromossómico de S. elodea por BamHI, EcoRI, HindIII e PstI.

Utlização de várias ferramentas disponíveis na web para análise de sequências de DNA e proteínas (mapa de restrição, escolha de iniciadores, pesquisa de ORFs, pesquisa de motivos conservados, topologia de proteínas, alinhamentos simples e múltiplos, obtenção de modelos tridimensionais para proteínas).

Reacção em cadeia da polimerase (PCR)

11 outubro 2007, 15:30 • Leonilde Morais Moreira

Discutiram-se os aspectos a ter em conta no desenho de iniciadores (primers) para amplificação por PCR. Justificou-se a necessidade de usar primers degenerados em situações particulares. Discutiu-se o conceito de primers híbridos e sua aplicaçao na introdução de locais de reconhecimento para uma determinada enzima de restrição no fragmento de DNA a amplificar para clonagem.

Introdução de plasmídeos em bactérias.

11 outubro 2007, 08:00 • Cristina Anjinho Viegas

Realização do TP1:

A- Introdução de DNA recombinado em células de Sphingomonas elodea ATCC 31461. Determinação da frequência e eficiência de electrotransformação.

B - Transferência de DNA recombinado de Escherichia coli HB101 para células de Pseudomonas aeruginosa 8858 (AlgC-) por conjugação triparental. Determinação da frequência de conjugação e observação da complementação homóloga ou heteróloga da deficiência no gene AlgC na estirpe P aeruginosa 8858, em resultado da introdução dos plasmídeos recombinados em causa.

(4 grupos do MEBiom)

Introdução de plasmídeos em bactérias

10 outubro 2007, 08:00 • Cristina Anjinho Viegas

Realização do TP1:

A- Introdução de DNA recombinado em células de Sphingomonas elodea ATCC 31461. Determinação da frequência e eficiência de electrotransformação.

B - Transferência de DNA recombinado de Escherichia coli HB101 para células de Pseudomonas aeruginosa 8858 (AlgC-) por conjugação triparental. Determinação da frequência de conjugação e observação da complementação homóloga ou heteróloga da deficiência no gene AlgC na estirpe P aeruginosa 8858, em resultado da introdução dos plasmídeos recombinados em causa.

(4 grupos do MEBiom + 1 grupo MEBiol)

Vectores de clonagem para eucariotas. Reaçcão em cadeia da polimerase (PCR)

9 outubro 2007, 15:30 • Leonilde Morais Moreira

Concluiu-se a descrição dos vectores de clonagem para levedura, plantas e insectos.

Apresentaram-se os fundamentos da amplificação de DNA por PCR. Iniciou-se a análise da selecção de "primers" a usar na reacção. Deram-se indicações sobre as condições experimentais de uma reacção típica.