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Dissertação

Characterization of anti-Pneumococcal surface protein C affibodies using surface plasmon resonance technology EVALUATED

Detalhes: Streptococcus pneumoniae é uma bactéria gram-positiva responsável por múltiplas doenças, tanto invasivas como não invasivas. Pneumonococcal surface protein C (PspC), uma proteína de S. pneumoniae, tem um papel importante na capacidade colonizadora e patogénica deste organismo, uma vez que se consegue ligar a Factor H (FH), uma proteína do sistema de complemento humano. Nesta tese, foram utilizadas técnicas de surface plasmon resonance (SPR) para medir a afinidade de affibodies (pequenas proteínas de afinidade) selecionadas para PspC2 da estirpe BHN418 de S. pneumoniae com três proteínas PspC (PspC1 e PspC2 de BHN418 e PspC da estirpe TIGR4). Outros objetivos principais envolveram mapear affibodies a uma região específica de PspC2 e determinar se a presença de affibodies interferia com ligação pré-estabelecida de PspCX (PspC1, PspC2, PspC) a FH. Os ensaios realizados demonstraram que os affibodies, especialmente sob a forma de heterodímeros, mostravam afinidade muito elevada e com forte ligação a PspC2, mas não se ligavam às restantes proteínas testadas. No setup testado os affibodies não interferiram com ligação pré-estabelecida de FH:PspC2. Face a estes resultados sugere-se a realização de experiências futuras para melhor compreensão do papel que estas pequenas moléculas podem assumir neste contexto. Um objetivo secundário foi a determinação da estrutura cristalina de PspC2 e a abertura de caminho para a determinação da estrutura de complexos affibodies:PspC2. Pequenos cristais foram obtidos mas não possuíam a qualidade necessária para poderem ser utilizados em difração de raios-X e resolver a estrutura. Como tal, torna-se necessário otimizar as condições.
Keywords: Proteína pneumocócica de superfície C, Affibodies, Ressonância Plasmónica de Superfície, Fator H

Discussão: dezembro 21, 2020, 10:0