Dissertação
Optimization of three-dimensional cultivation conditions for the isolation and expansion of human mesenchymal stem cells EVALUATED
As células mesenquimais estaminais (MSCs) trazem várias vantagens ao ramo da medicina regenerativa, abrindo portas a novas e melhoradas opções terapêuticas. Doenças degenerativas e imunológicas têm agora novas hipóteses de ser tratadas recorrendo a estas células de origem humana, facilmente isoladas a partir de uma variedade de tecidos. Neste trabalho, cultivaram-se células mesenquimais derivadas de tecido adiposo (adMSCs) através de dois métodos: expansão dinâmica de agregados celulares num reator agitado e isolamento estático a partir de explante de tecido adiposo numa matriz de lisado de plaquetas humanas (hPL). O objetivo foi melhorar as condições de cultivo de modo a atingir um maior número de células. Para este efeito, testaram-se diferentes combinações entre parâmetros no bioreator: 5, 7 e 10% de O2 e agitação de 100, 250 e 400 rpm. Posteriormente, realizaram-se testes para viabilidade metabólica, senescência e migração e, juntamente com medições de proliferação, oxigénio e glucose/lactato, estudou-se o impacto das condições aplicadas nas MSCs. Para o isolamento a três-dimensões (3D) na matriz de hPL, otimizou-se a criopreservação do tecido adiposo, período de cultivo e colheita das células. Na expansão dinâmica, os resultados apontam para uma maior proliferação atingida através do fornecimento de uma percentagem de O2 mais baixa (5%) e formação de agregados maiores para menores velocidades de agitação. Relativamente ao isolamento 3D, as células isoladas do tecido adiposo congeladas sem meio de criopreservação apresentaram maior viabilidade. Para maior fornecimento de O2 (21%), as condições 3D usando a matriz de hPL mostraram-se mais vantajosas do que a duas-dimensões (2D).
junho 19, 2018, 15:0
Publicação
Obra sujeita a Direitos de Autor
Orientação
ORIENTADOR
Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Auxiliar