Dissertação

Optimizing the production of human mesenchymal stem/stromal cells in xeno-free microcarrier-based reactor systems EVALUATED

Estudos do grupo SCBL-RM demonstraram que hMSCs isoladas do tecido adiposo (AT-hMSCs) e da medula óssea (BM-hMSCs) podem ser eficientemente expandidas num sistema de cultura com microcarriers em condições xeno-free usando spinner flasks. O trabalho desenvolvido nesta tese teve como objectivo avaliar parâmetros críticos para a cultura agitada de hMSCs em microcarriers, com o propósito de aumentar a produtividade geral, tentando reduzir custos associados. Foi avaliado um novo tipo de microcarriers que demonstrou ser uma alternativa eficaz aos microcarriers de plástico (SoloHill) revestidos com CELLstart™ (previamente implementados no SCBL-RM) com a vantagem de não necessitarem de um processo de revestimento adicional antes da cultura celular. Nas culturas com os novos microcarriers, AT-hMSCs atingiram uma densidade celular máxima de (2.7±0.38)×10^5 células/mL em 7 dias (12±2.6-fold), enquanto as BM-hMSCs atingiram densidades de (3.8±1.0)×10^5 células/mL em 9 dias (18±4.9-fold). Em culturas com Plastic+CELLstart, AT-hMSCs expandiram mais devagar até ao dia 11, gerando (2.7±0.75)×10^5 células/mL (13±3.0-fold). BM-hMSCs tiveram o mesmo crescimento que nos novos microcarriers, atingindo (3.6±1.5)×10^5 células/mL em 9 dias (22±11-fold). A adição de microcarriers durante a cultura de BM-hMSCs resultou na eficiente transferência de células entre microcarriers, diminuindo a formação de agregados de célula-microcarrier de grandes dimensões. Depois da cultura em spinner flask, hMSCs expressaram o característico imunofenótipo e mantiveram a capacidade de diferenciação em linhagem osteogénica, adipogénica e condrogénica, após indução. Adicionalmente, as células expandidas em spinner flasks demonstraram superior secreção de VEGF (vascular endotelial growth factor), indicando que as BM-hMSCs expandidas em sistemas dinâmicos poderão ter um potencial pro-angiogénico melhorado.
Células estaminais mesenquimais humanas, Expansão ex vivo, Sem componentes xenogénicos, Cultura em spinner flask, Microcarriers, Produtividade

Junho 26, 2013, 15:30

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Joaquim Manuel Sampaio Cabral

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedrático

ORIENTADOR

Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar