Dissertação

Creation of genetic constructs for production of new glycolipids by Candida bombicola EVALUATED

O interesse em biosurfactantes tem sido crescente nos últimos anos devido às suas características, tornando-os alternativas adequadas aos seus homólogos químicos. Os soforolípidos são biossurfactantes bastante promissores e são produzidos por Candida bombicola, em grandes quantidades. Um dos objectivos deste trabalho foi de manipular geneticamente Candida bombicola, a fim de produzir soforolípidos desacetilados. Para tal uma cassete de knock-out foi produzida, em que o gene da acetiltransferase foi transformado pela remoção de alguns pares de bases. Como marca de selecção, foi utilizada higromicina e esta foi inserida dentro da região codificante do gene mutado da acetiltransferase. A cassete foi totalmente produzida em E. coli, mas a transformação para Candida bombicola falhou talvez porque o gene da acetiltransferase desempenha diferentes papéis no metabolismo primário para além da esperada acetilação de soforose durante a produção de soforolípidos. Para estudar a actividade da proteína acetiltransferase, a sua produção heteróloga foi testada em E. coli BL21. Como tal um vector de expressão foi criado e a máxima produção de proteína foi analisada após indução com IPTG. No entanto não se conseguiu observar esta proteína em SDS-PAGE. Uma glicosiltransferase envolvida na produção de lipídios de celobiose foi também analisada. Para estudar a proteína com maior detalhe, o gene foi clonado no vector pYES TOPO e introduzido em Saccharomyces cerevisiae. A produção de proteína foi verificada, através de um plasmídeo controlo contendo o gene LacZ, após a indução em meio de cultura contendo galactose em que um nível máximo foi obtido após 16 horas de indução.
Candida bombicola, soforolípidos, biosurfactantes, gene, acetiltransferase, glucosiltransferase

Outubro 29, 2009, 14:30

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Wim Sotaert

Ghent University, Faculty of Bioscience and Engineering

Especialista

ORIENTADOR

Isabel Maria De Sá Correia Leite de Almeida

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Catedrático