Dissertação

Cas4 solo in phages enhances host CRISPR autoimmunity EVALUATED

A combinação de CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) com os seus genes associados (cas), constitui um sistema imunitário adaptativo, encontrado em procariontes. Estes organismos desenvolveram uma vasta diversidade destes sistemas, que podem ser divididos em duas classes e mais de 30 subtipos. A capacidade de adaptação da sua memória imunológica é conseguida através da integração de pequenos fragmentos de DNA dos organismos invasores (protospacers) no CRISPR locus. O CRISPR array é, depois, transcrito levando à formação de crRNAs que recrutam as proteínas Cas (codificadas pelos genes cas) e levam, por conseguinte, à destruição do material genético dos organismos invasores. Uma das proteínas CRISPR associadas é Cas4, cuja função foi recentemente descrita. O gene cas4 encontra-se localizado, usualmente, nas proximidades dos genes cas1ou cas2, sendo crucial no reconhecimento, processamento e orientação de protospacers, durante a sua integração. Curiosamente, os genes cas4 foram recentemente encontrados não associados ao CRISPR-Cas loci, em genomas de bactérias e archaea, bem como plasmídeos e bacteríofagos, sendo o seu papel desconhecido. Aqui, estudou-se a filogenia desses Cas4 solo em fagos (vCas4) e a sua influência na adaptação dos sistemas CRISPR através de ensaios in vivo and in vitro tendo sido demonstrado que esta proteína, embora não interaja diretamente com o módulo de acquisição dos sistemas CRISPR, influencia os rácios de aquisição de novos spacers. Além disso, por sequenciação dos novos spacers adquiridos, foi possível revelar que mais spacers com origem no organismo hospedeiro são integrados o que, consequentemente, contribui para a auto-imunidade dos sistemas CRISPR.
sistema CRISPR-Cas, proteínas Cas,  vCas4, bacteriófagos, adaptação CRISPR, auto-imunidade

Outubro 11, 2018, 14:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

ORIENTADOR

Miguel Nobre Parreira Cacho Teixeira

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar

ORIENTADOR

Stan Brouns

Delft University of Technology

Associate Professor