Dissertação
Investigation and Monitoring of Antibody Aggregation in Biopharmaceutical Manufacturing EVALUATED
Na produção de anticorpos monoclonais (mAb), aggregados proteicos exigem um controlo rigoroso. Este trabalho foca-se em compreender os mecanismos de agregação de anticorpos, e avaliar a espectroscopia Raman como ferramenta de quantificação de agregados em tempo real num processo. Dois mAbs foram estudados. O comportamento de agregação sob condições de stress impostas por mudanças de pH foi investigado para perceber o que promove agregação durante o passo de inactivação viral durante o Downstrem Processing (DSP). Uma célula de fluxo foi desenvolvida para integração no efluente cromatográfico do passo de purificação final do DSP. Finalmente, foi testado o potencial da espectroscopia Raman para quantificação de agregados de mAbs. Entre pH 2.5 e 3.5 e baixa força iónica, repulsão electrostática entre as moléculas previne a coagulação dos mAb. Formação de agregados ocorre quando a solução é neutralizada para valores de pH e força iónica mais altos. Para além destes parâmetros, tempo de incubação e presença de aditivos também afetam o processo de agregação, quando a incubação é a pH 3.5. Foram investigadas técnicas de suavização para dados espectrais e comparadas ao filtro Savitzky-Golay, apresentando melhores resultados. A previsão da concentração de monómero com um modelo de regressão apresentou bons resultados. A previsão da concentração de agregados numa gama relevante para o processo não foi possível. No entanto, numa gama mais alargada, o modelo de regressão conseguiu previr a mesma com um erro relativo de 8%, apresentando o primeiro alicerce para a possibilidade de monitorização online de agregados de mAbs com tecnologia Raman.
dezembro 4, 2018, 16:0
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