Dissertação
Studying the Effect of the ROCK Inhibitor on the Proliferation Potential of Human Induced Pluripotent Stem Cells under 2D/3D and Static/Dynamic Culture Environments EVALUATED
Células estaminais pluripotentes induzidas humanas (hiPSCs) têm propriedades de autorrenovação ilimitada e a capacidade de originarem células das três camadas germinativas embrionárias. O potencial clínico destas células possibilitou o desenvolvimento de trabalho promissor para aplicações futuras, contudo ter protocolos completamente definidos para a sua manutenção e manuseamento, mantendo boas práticas de fabricação (GMP), é ainda um desafio universal. Neste trabalho, dois stocks de hiPSCs da mesma linha (1383D2) foram comparados, visto que um deles demonstrou ter mudanças fenotípicas significativas. A contribuição do inibidor ROCK foi estudada em cultura 2D por 24 horas, e em cultura 3D estática e dinâmica, por 48 horas e 96 horas. Em cultura 2D, a cinética de crescimento para os dois tipos de stocks mostrou ser semelhante. Contudo, em cultura 3D dinâmica, o rácio de células vivas para as células alteradas não foi superior a 0.20, quando comparando com o outro stock (0.67 ± 0.04). Já a taxa de crescimento específico aparente foi globalmente muito superior nestas células, sendo a mais elevada de 3.57 x 10-2 h-1, alcançada em cultura 3D estática, exposta ao inibidor ROCK por 96 horas. Naturalmente, os agregados maiores (avaliados através do diâmetro dos agregados) foram obtidos em cultura dinâmica. Todavia, para o estudo da morfologia e viabilidade dos agregados, a expressão de E-caderina e Ki-67 foi também analisada, que mostrou que agregados maiores sofrem necrose central com o progresso da cultura. Não obstante, apesar das diferenças, os presentes resultados permitiram concluir que estas células alteradas estão possivelmente viáveis para uso futuro.
novembro 16, 2018, 11:0
Publicação
Obra sujeita a Direitos de Autor
Orientação
ORIENTADOR
Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Auxiliar