Dissertação

Studying the Effect of the ROCK Inhibitor on the Proliferation Potential of Human Induced Pluripotent Stem Cells under 2D/3D and Static/Dynamic Culture Environments EVALUATED

Células estaminais pluripotentes induzidas humanas (hiPSCs) têm propriedades de autorrenovação ilimitada e a capacidade de originarem células das três camadas germinativas embrionárias. O potencial clínico destas células possibilitou o desenvolvimento de trabalho promissor para aplicações futuras, contudo ter protocolos completamente definidos para a sua manutenção e manuseamento, mantendo boas práticas de fabricação (GMP), é ainda um desafio universal. Neste trabalho, dois stocks de hiPSCs da mesma linha (1383D2) foram comparados, visto que um deles demonstrou ter mudanças fenotípicas significativas. A contribuição do inibidor ROCK foi estudada em cultura 2D por 24 horas, e em cultura 3D estática e dinâmica, por 48 horas e 96 horas. Em cultura 2D, a cinética de crescimento para os dois tipos de stocks mostrou ser semelhante. Contudo, em cultura 3D dinâmica, o rácio de células vivas para as células alteradas não foi superior a 0.20, quando comparando com o outro stock (0.67 ± 0.04). Já a taxa de crescimento específico aparente foi globalmente muito superior nestas células, sendo a mais elevada de 3.57 x 10-2 h-1, alcançada em cultura 3D estática, exposta ao inibidor ROCK por 96 horas. Naturalmente, os agregados maiores (avaliados através do diâmetro dos agregados) foram obtidos em cultura dinâmica. Todavia, para o estudo da morfologia e viabilidade dos agregados, a expressão de E-caderina e Ki-67 foi também analisada, que mostrou que agregados maiores sofrem necrose central com o progresso da cultura. Não obstante, apesar das diferenças, os presentes resultados permitiram concluir que estas células alteradas estão possivelmente viáveis para uso futuro.
Células iPS humanas, Inibidor ROCK, Cultura estática, Cultura dinâmica, Cinética de crescimento, Desenvolvimento de agregados

Novembro 16, 2018, 11:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

ORIENTADOR

Masahiro KINO-OKA

Graduate School of Engineering, Osaka University

Professor

ORIENTADOR

Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar