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Dissertação

TERRA transcription profiles in human cancer cells EVALUATED

Detalhes: TERRA é um RNA longo não codificante transcrito a partir de telómeros eucariotas, um desencadeador importante do mecanismo Alternative Lengthening of Telomeres (ALT) independente de telomerase, utilizado por 15% dos cancros humanos para contrariar o encurtamento telomérico que ocorre com múltiplas divisões celulares. Várias linhas celulares ALT contêm níveis elevados de TERRA. Contudo, o conhecimento do perfil de transcrição de TERRA continua a ser limitado, tanto em relação aos níveis de transcrição de TERRA em diferentes linhas celulares, como às extremidades cromossómicas a partir das quais TERRA se origina. Através de sequenciação de TERRA em células ALT e telomerase-positivas, o laboratório Azzalin verificou que os níveis de TERRA transcrito pelas extremidades cromossómicas 7q e 12q aparentam estar especialmente elevados em células ALT, e levantou a hipótese que a quantificação de TERRA nestas extremidades poderia constituir uma ferramenta diagnóstica de cancros ALT. Os dados da sequenciação de TERRA foram validados através de RT-qPCR. Foi demonstrado que os níveis de TERRA são elevados em várias extremidades, particularmente 7q, 12q, 16p e 5p. TERRA destas extremidades foi quantificado em 10 a 20 moléculas por célula, um aumento médio de 5 a 10 vezes em relação a células telomerase-positivas. Consideramos que este aumento não é suficiente para estabelecer um limiar de TERRA 7q e 12q para discriminar células ALT. As extremidades 7q e 12q não contêm o promotor de TERRA rico em nucleótidos CpG previamente caracterizado. Logo, a segunda parte deste projeto consistiu em identificar, isolar e caracterizar um novo promotor putativo nestas extremidades.
Keywords: TERRA, transcrição telomérica, Alternative Lengthening of Telomeres, RT-qPCR

Discussão: janeiro 18, 2021, 10:0