Establishment of mouse Embryonic Stem cell lines with a reporter of Dll1 activity EVALUATED

Detalhes: Este trabalho tem como objectivo gerar uma linha celular transgénica de células estaminais embrionárias de ratinho contendo um repórter fluorescente com o intuito de visualizar a actividade do gene Dll1 nas células estaminais embrionárias através de BAC recombineering. Assim, o trabalho desenvolvido foi dividido em duas partes de considerável importância para este projecto. Na primeira parte procurou-se contribuir para a geração da linha celular transgénica de células estaminais embrionárias de ratinho, nomeadamente através da instituição de um protocolo de extracção do BAC, assim como um para a sua visualização. Este objectivo foi alcançado através do estudo dos vários passos de extracção de DNA utilizando um kit comercial e um método de extracção ?tradicional?, protocolos que foram posteriormente comparados. Esta parte do estudo revelou vários pontos fracos na utilização do kit commercial e levou à instituição de um protocolo de extracção baseado num outro descrito por Bill Richardson e Nicoletta Kessaris, em 2006. Na segunda parte do trabalho, o intuito era o de contribuir para a validação do modelo utilizado no laboratório, mais especificamente atendendo à relação entre a expressão do gene Dll1, o ?movimento nuclear inter-cinético? e o ciclo celular nas rosetas. Para isso, realizaram-se ensaios imunocitoquímicos em células estaminais embrionárias de ratinho contendo um repórter fluorescente para monitorizar a actividade do gene Dll1, amplificadas e diferenciadas in vitro, e concluiu-se que o seu comportamento podia ser considerado análogo ao observado em células do tubo neural (in vivo).

Discussão: novembro 23, 2009, 9:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

AUTOR

Rúben Duarte Magalhães Alves Pereira (ist155754)

ORIENTADOR

Domingos Manuel Pinto Henrique

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Associado Convidado