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Dissertação

Bio-engineering of neuromesodermal progenitors EVALUATED

Detalhes: Os progenitores de neuromesoderme (NMPs) são uma população celular apontada como responsável pela origem quer de precursores do sistema nervoso central posterior, quer de linhagens da mesoderme que irão gerar a medula espinal. Esta população está activa durante a gastrulação embrionária, em que células do epiblasto sofrem diferenciação para estabelecerem três linhas germinais que darão origem a todos os tecidos do embrião. A partir de estudos in vitro, NMPs podem ser gerados a três dimensões (3D), em agregados celulares chamados gastrulóides, usando a via de sinalização Wnt para activar elongação tridimensional. No entanto, este é um método com limitações em termos de eficiência e reprodutibilidade. Por essa razão, neste projecto tive por objectivo desenvolver métodos mais robustos para gerar e propagar NMPs em cultura a partir de células estaminais embrionárias de murganho (mESCs). Para medir os resultados, utilizei uma avaliação morfológica, em que os agregados foram contados e medidos em dias-chave, fazendo também detecção por fluorescência de células-repórter para o gene Sox1 e imunofluorescência com marcadores moleculares relevantes para identificar NMPs. Os resultados mostram um aumento no número de agregados formados e elongados quando o polímero (PLGA) é usado, exibindo também um desenvolvimento mais padronizado, com menos variabilidade e portanto mais reprodutível do que o protocolo-base. Finalmente, encontrei tecido neural emergente nos agregados em extensão quando há presença das fibras, organizado numa estrutura semelhante ao tubo neural e mostrando indícios de polaridade epitelial apico-basal, sugerindo portanto o uso de PLGA enquanto suporte mecânico na organização dos tecidos.
Keywords: mESCs; NMPs; PLGA; Gastrulóides.

Discussão: novembro 11, 2016, 10:30