Dissertação

Unravelling the role of NANOG in the regulation of priming gene expression EVALUATED

O fator de transcrição NANOG exibe uma expressão heterogénea nas células estaminais embrionárias de murganho (CEE). Esta variabilidade surge de flutuações estocásticas em cada célula, o que cria “janelas de oportunidade” para estas explorarem a pluripotência. As células baixo-NANOG (“lineage-primed”) são mais suscetíveis a diferenciarem e exibem uma maior expressão de “genes linhagem”, do que as células elevado-NANOG. Contudo, desconhece-se como o NANOG controla a saída da pluripotência das CEE. Estudos revelaram que o NANOG interage com o Polycomb complexo repressivo 2 (PRC2) e a translocação ten-eleven 1 (TET1), responsáveis pela trimetilação do H3H27 e pela demetilação do DNA, respetivamente. Além disso, os genes “upregulated” nas células baixo-NANOG (“genes priming”, que incluem os de linhagem) ligam-se ao PRC2. Deste modo, formulou-se a hipótese de que o NANOG reprime a expressão de “genes priming” através da regulação de PRC2 e TET1, mas como? De forma a desvendar estes mecanismos, as linhas celulares E14tg2a e Nd (com repórter Nanog:VNP) foram cultivadas em “Soro/LIF”. As CEE foram incubadas com GSK343, um inibidor do PRC2, e ácido ascórbico (AA), um promotor das TET1. De seguida, a expressão dos “genes priming” foi avaliada através de single-molecule RNA FISH. De acordo com resultados preliminares, agora confirmados, GSK343 aumenta a expressão de “genes linhagem” nas células elevado-Nanog, enquanto AA diminui. Desta forma, propõem-se que o NANOG forme um complexo com a TET1, que ao manter um estado hipometilado, contribui para o recrutamento de PRC2 e para a repressão da expressão dos “genes linhagem”.
NANOG, células estaminais embrionárias, pluripotência, heterogeneidade, PRC2, TET1.

Novembro 9, 2016, 10:30

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Domingos Manuel Pinto Henrique

Instituto de Medicina Molecular – Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Doutor

ORIENTADOR

Maria Margarida Fonseca Rodrigues Diogo

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar