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Dissertação

Development of a microfluidic rolling circle amplification module for bacterial detection EVALUATED

Detalhes: A resistência a antibióticos é um problema de saúde que tem piorado nas últimas décadas, e a ineficácia dos antibióticos utilizados para inibir a proliferação de bactérias resistentes, torna estas infeções bastante difíceis de tratar. De modo a prevenir a propagação destas infeções, métodos de diagnóstico rápidos e precisos são extremamente necessários. A microfluidica proporciona uma excelente plataforma para este tipo de dispositivos, particularmente para diagnósticos em point-of-care, devido às vantagens que oferece, como o tamanho reduzido, uma maior razão de superfície para volume, assim como custo de fabricação reduzido. Neste trabalho foi desenvolvido um módulo microfluidico de rolling circle amplification (RCA) para a deteção de bactérias, utilizando Staphylococcus aureus como modelo. Este ensaio utiliza um canal microfluidico com beads de streptavidina em que uma probe de DNA se irá ligar às beads através da ligação da streptavidina e biotina e hibridiza com uma padlock. O DNA target a ser detetado irá hibridizar com a padlock e posteriormente amplificado através de RCA. Ao longo deste trabalho foram realizadas várias otimizações ao modo de captura, incluindo a forma como as moléculas eram introduzidas no canal e flow rates. Foram também realizadas várias otimizações de bloqueios de forma a minimizar o sinal não específico. A captura do DNA target foi efetuada em várias soluções, concluindo-se que era possível capturá-lo em todas as condições testadas. A captura do DNA target foi também quantificada, sendo capturado com eficiências entre 27% to 77% e através do RCA foi possível detetar apenas 1% dos produtos amplificados.
Keywords: Resistência a antibióticos, Staphylococcus aureus, rolling circle amplification, sistema microfluidico

Discussão: novembro 23, 2021, 11:0