{en=DENGUE VIRUS STRUCTURAL PROTEINS: CHARACTERIZATION OF THE MEMBRANE ACTIVE REGIONS OF PROTEINS C AND E} {en=CHARACTERIZATION OF THE MEMBRANE ACTIVE REGIONS OF PROTEINS C AND E} EVALUATED

Detalhes: {pt=Identificámos as regiões da proteína da cápside (C) e glicoproteína E do vírus da dengueque interagem com biomembranas, sendo utilizadas para tal peptidotecas representativas de 14 péptidos de 15 a 18 aminoácidos de comprimento para aquela e de 67 péptidos de 15 a 20 aminoácidos de comprimento para esta. Para identificar as ditas regiões, foi utilizada espectroscopia de fluorescência, fazendo uso da alteração de sinal de fluorescência de uma solução contendo lipossomas encapsulando a sonda 5(6) carboxifluoresceína. No caso da proteína C, duas regiões induziram ruptura de membranas, a primeira situada na zona da segunda hélicedos resíduos 39 ao 56com aproximadamente 100% de ruptura de membrana e a segunda na zona da quarta hélice , dos resíduos 92 ao 113, facto que suporta o seu papel fundamental no ciclo viral. Quanto à proteína E, quatro zonas induziram ruptura de membranas, dos resíduos 88 ao 122, dos resíduos 198 ao 221 (situados no domínio II da proteína E), dos resíduos 263 ao 309 (zona comum aos três domínios) e dos resíduos 406 ao 479 (situado na zona C-terminal do domínio III da proteína E). O péptido de fusãodo serotipo 2 do vírus da dengue está situado na primeira zona referida e o domínio III (representado pela última zona) é o presumível local de ligação aos receptores. Esta última apresenta elevados valores percentuais de ruptura de membrana, chegando a atingir 70%, o que atesta o seu papel como desestabilizadora de membranas. , en=We have identified the membrane-active regions of dengue virus capsid protein and E glycoprotein, using representative peptide libraries composed of 14 peptides of 15- to 18-mers for capsid protein (C) and of 67 peptides of 15- to 20-mers for protein E. To identify those regions, fluorescence spectroscopy was used, making use of the fluorescence signal variation of a solution containing liposomes encapsulated with 5 (6) carboxyfluorescein molecular probe. Two membrane active regions were identified in capsid protein (C), one from residues 39 to 56, in the second  helix region, inducing almost 100% of membrane rupture in all membranes and another from residues 92 to 113, with lower values of membrane leakage (from 30% to 70%), fact supporting the fundamental role of this protein in the viral cycle. As for protein E, four distinct membrane active regions were defined, from residues 88 to 122, from residues 198 to 221 (both located in domain II of protein E), from residues 263 to 309 (common zone to the three domains) and from residues 406 to 479 (located in the C-terminal region of protein E, that is, in domain III). The fusion peptide of dengue virus type 2 is located in the first referred zone and domain III (represented by the last zone) is the assumed receptor binding site. This last zone presents the highest membrane leakage values, attaining 70%, what clearly defines its role as a membrane destabilizer. }

Discussão: outubro 14, 2010, 16:0

Orientação

AUTOR

Henrique de Castro Nemésio (ist157282)

CO-ORIENTADOR

Miguel Augusto Rico Botas Castanho

Universidade de Lisboa - Faculdade de Medicina

Professor Catedrático

ORIENTADOR

Manuel José Estevez Prieto

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Associado