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Dissertação

A Lab-on-a-chip Device for the Purification of Monoclonal Antibodies EVALUATED

Detalhes: A procura por anticorpos monoclonais (mAbs) tem aumentado nos últimos anos, devido à sua eficácia no tratamento de diversas doenças fatais, e tem havido esforços para o desenvolvimento de processos mais eficientes que consigam produzir grandes quantidades de mAb puro a preços razoáveis. Os processos de purificação são um dos principais enfoques para melhorar a produção de mAbs, com esforços a serem direcionados para o melhoramento do rendimento, produtividade e pureza. As plataformas Lab-on-a-chip revolucionaram o desenvolvimento de processos, devido ao seu potencial de miniturização, integração e automação. As host cell proteins secretadas por duas linhas celulares diferentes CHO foram caracterizadas no que diz respeito ao seu tamanho e carga, o que permitiu identificar condições cromatográficas promissoras. Duas resinas de troca aniónica foram escolhidas para permitir a adsorção das impurezas, enquanto que o anticorpo não é retido na coluna. A Q-Sepharose, uma resina de troca aniónica forte, foi determinada como tendo uma maior capacidade de adsorção e foi seleciondada para realizar ensaios de otimização à escala microfluídica. Curvas breakthrough e ensaios de adsorção/eluição foram realizados em colunas microfluídicas usando inicialmente proteínas-modelo (BSA e o mAb purificado), depois uma mistura artificial de ambas e por fim CHOPs (fracionadas por cromatografia usando proteína A). Os ensaios de adsorção mostraram que a BSA e as CHOPs têm uma retenção longa nas condições estudadas. A ligação não específica do mAb à coluna pode ser reduzida pelo aumento da força iónica da adosrção até 20 mM NaCl, sem afetar a capacidade de ligação das impurezas.
Keywords: Anticorpos monoclonais, células CHO, CHO host cell proteins, Cromatografia de troca iónica, Lab-on-a-chip

Discussão: novembro 2, 2018, 10:30