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Dissertação

Development of a microfluidic sample preparation system for bacteria magnetic labelling and capture in clinical samples EVALUATED

Detalhes: As infeções hospitalares representam um dos novos desafios de saúde pública do novo século. Técnicas rápidas, económicas e eficientes para a deteção destas infeções são essenciais. A citometria magnética representa uma tecnologia emergente, no entanto, a complexidade da matriz da amostra e a necessidade de marcação das células bacterianas exige uma etapa prévia de preparação da amostra, então o pré-tratamento da amostra deve ser integrado. As etapas necessárias são a marcação das bactérias com partículas magnéticas e a sua concentração num menor volume. A marcação magnética requer a imobilização de elementos de reconhecimento (anticorpos) específicos para a bactéria alvo, na superfície das partículas magnéticas. Neste contexto, um ensaio de bancada para imobilização de anticorpos e captura e concentração de bactérias foi otimizado. Dispositivos microfluídicos baseado em PDMS foi produzido onde os parâmetros definidos no protocolo de bancada foram implementados. A capacidade dos dispositivos microfluídicos, na marcação e concentração de bactérias, foi avaliada e comparada com os resultados do ensaio de bancada. Foram utilizadas amostras enriquecidas com diferentes concentrações de bactérias alvo, nomeadamente em solução tampão controlada e amostras clínicas, representando toda a complexidade da matriz real. O desempenho no processamento da amostra traduziu-se numa eficiência de captura de 86% ± 9% para uma concentração de 2 * 10^5 CFU/ml, enquanto a concentração mais baixa com diferença significativa entre o controlo positivo e negativo é 2 * 10^3 CFU/ml . O processamento da amostra clínica ofereceu resultados limitados devido à alta variabilidade na concentração da amostra, embora com resultados qualitativos promissores.
Keywords: preparação de amostra, pré-tratamento da amostra, microfluídica, marcação, capturar, separação imunomagnética

Discussão: janeiro 19, 2021, 11:0