Avaliação da actividade autocinase da proteína BceF

5 dezembro 2014, 14:00 • Miguel Nobre Parreira Cacho Teixeira

Avaliação da actividade autocinase da proteína BceF por imunodetecção de resíduos de fosfotirosinas, com anticorpo específico para estes resíduos. Esta imunodetecção foi feita sobre uma membrana contendo fracções de duas formas da proteína purificada BceF: uma forma selvagem, que retem a actividade, e uma forma mutada no local de ligação a ATP, que é incapaz de funcionar como cinase.

Avaliação da actividade autocinase da proteína BceF

1 dezembro 2014, 14:00 • Miguel Nobre Parreira Cacho Teixeira

Avaliação da actividade autocinase da proteína BceF por imunodetecção de resíduos de fosfotirosinas, com anticorpo específico para estes resíduos. Esta imunodetecção foi feita sobre uma membrana contendo fracções de duas formas da proteína purificada BceF: uma forma selvagem, que retem a actividade, e uma forma mutada no local de ligação a ATP, que é incapaz de funcionar como cinase.

SDS-PAGE seguido de western blot

28 novembro 2014, 14:00 • Miguel Nobre Parreira Cacho Teixeira

Tendo-se selecionado as amostras mais enriquecidas com a proteína BceF, purificada na aula anterior, procedeu-se a uma electroforese das referidas amostras em gel de poliacrilamida.

Foram obtidos dois geis, um utilizado para vizualização da proteína total após coloração com azul de comassie e o outro utilizado para o processo de transferência para uma membrana de nitrocelulose (western blot).

SDS-PAGE seguido de western blot

24 novembro 2014, 14:00 • Miguel Nobre Parreira Cacho Teixeira

Tendo-se selecionado as amostras mais enriquecidas com a proteína BceF, purificada na aula anterior, procedeu-se a uma electroforese das referidas amostras em gel de poliacrilamida.

Foram obtidos dois geis, um utilizado para vizualização da proteína total após coloração com azul de comassie e o outro utilizado para o processo de transferência para uma membrana de nitrocelulose (western blot).

Super-produção e purificação da proteína BceF

21 novembro 2014, 14:00 • Miguel Nobre Parreira Cacho Teixeira

Indução por exposição a IPTG da super-produção da proteína BceF-HIS de Burkholderia cepacia em E. coli. Extracção proteica e purificação da proteína BceF por coluna de afinidade com a cauda de histidinas. Avaliação do sucesso da purificação por electroforese em gel de poliacrilamida.