Dissertação
Contribution to the identification of surface-exposed immunogenic proteins of bactéria from the Burkholderia cepacia complex EVALUATED
O complex Burkholderia cepacia (Bcc) é composto por patogénicos oportunistas capazes de causar infeções respiratórias, por vezes letais, em doentes com Fibrose Quística (FQ). Não existem actualmente terapias eficazes na erradicação de Bcc de doentes com FQ cronicamente infetados, pois estas bactérias possuem muitas vezes resistência intrínseca e adquirida aos antibióticos em uso. Neste contexto, torna-se necessário desenvolver novas estratégias terapêuticas contra as infecções por Bcc. As proteínas da superficie externa constituem alvos excelentes para o desenvolvimento de vacinas e de ferramentas de base imunológica para o diagnóstico da infecção, pois estão expostas e são facilmente acessíveis pelos vários componentes do sistema imunitário do hospedeiro. Neste trabalho, uma nova abordagem designada “surfómica” foi aplicada a Burkholderia cenocepacia J2315, visando a identificação de proteínas de superfície potenciais alvos para o desenvolvimento de vacinas. A abordagem consistiu na digestão de células viáveis de B. cenocepacia J2315 com tripsina em condições que minimizaram a lise celular, tendo os péptidos resultantes (o surfoma) sido analisados por métodos de cromatografia de fase líquida acoplada a espectrometria de massa (LC/MS/MS). Entre as proteínas identificadas, seleccionou-se a proteína do tipo PspA BCAL2022, previamente identificada por imunoproteómica. O gene BCAL2022 foi clonado e a proteína purificada, mostrando-se que é imunoreativa com soros de doentes Portugueses com FQ infectados com Bcc. Os resultados obtidos mostram que a abordagem da “surfómica” pode ser usada para identificar proteínas da superfície externa de bactérias do Bcc, um passo importante na identificação e selecção de proteínas imunogénicas do Bcc.
novembro 29, 2019, 17:30
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