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Dissertação

Exploring aggregation-inducers for tau protein EVALUATED

Detalhes: Tau é uma proteína neuronal intrinsecamente desordenada e também associada a microtúbulos, cuja deposição anormal no cérebro está ligada a inúmeras doenças neurodegenerativas. Estas Tauopatias incluem a doença de Alzheimer e a demência frontotemporal (com mais de 20 doenças). Várias mutações de doenças na Tau, incluindo P301L, prejudicam a função da Tau (ligação e estabilização dos microtúbulos) e também promovem a sua agregação patológica (perda ou ganho de função). A fibrilação da Tau in vitro foi extensivamente explorada por estudos de fluorescência com Tioflavina-T (ThT) realizados com o fragmento propenso à agregação K18 de Tau, compreendendo apenas o domínio de ligação aos microtúbulos. Além disso, a agregação da isoforma mais longa de Tau - 2N4R - na presença de indutores de agregação tem sido largamente ignorada. Aqui, investigamos os efeitos de dois promotores de agregação aniónicos - heparina e vesículas lipídicas aniónicas - na fibrilação de proteínas Tau do tipo wild-type (WT) e com a mutação P301L. Inicialmente, ambas as variantes WT e P301L foram expressas e purificadas de forma recombinante. Em seguida, foram realizados ensaios de fluorescência com ThT para ambas as proteínas em solução e na presença de heparina ou membranas contendo fosfatidilserina. Os nossos ensaios apresentam alguma variabilidade no sinal absoluto da ThT, mas globalmente os dados indicam que a heparina funciona como um promotor de agregação mais forte para WT e P301L Tau do que vesículas lipídicas aniónicas (aqui com efeitos menores). Além disso, a heparina tem um efeito maior na agregação da proteína P301L Tau.
Keywords: Doença de Alzheimer, Proteína Tau, Heparina, Membranas Lipídicas e Tioflavina-T

Discussão: dezembro 6, 2023, 9:0

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