Dissertação
Set-up and comparison of the Droplet Digital PCR method with quantitative RT-PCR in assessing the levels of microRNA-124 from plasma and brain tissue of rats with traumatic brain injury EVALUATED
O traumatismo crânio-encefálico (TCE) é a causa predominante de epilepsia secundária. Nos últimos 30 anos. A incidência cumulativa do pós-traumatismo crânio-encefálico na epilepsia secundária é de 2.1% nos traumatismos ligeiros, 4.2 % nos moderados e de 16.7% nas lesões graves. Este facto torna fulcral a busca de um biomarcador que identifique as lesões que culminarão numa epilepsia secundária. No presente trabalho testámos a hipótese da utilização do miR-124, existente no plasma, como marcador clínico no modelo de TCE por percussão lateral por fluido. Esta expressão foi testada em duas fases, na fase aguda e na fase crónica. O córtex ipsilateral foi estudado apenas na fase crónica. Foram aplicadas duas técnicas, PCR digital (ddPCR) e qRT-PCR (multiplex e miR-124 specific cDNAs), tendo a sensibilidade de ambas as técnicas sido comparada. A relação entre a extensão da lesão e os níveis de miR-124 no plasma foi também investigada. Este estudo evidenciou o miR-124 como potencial biomarcador nos TCEs na fase aguda. Quando se compararam os resultados das amostras provenientes do segundo dia pós-trauma com os de amostras controlo, verificámos um aumento de 260% em qRT-PCR (p<0,01), 223% (p<0.05) em multiplex ddPCR, e 147% (p<0.05) com ddPCR específico para o miR-124. Ao compararmos estas mesmas amostras com as amostras controlo do mesmo dia, foi obtido um aumento de 180% no qRT-PCR (p<0.05), 209% (p<0.05) no ddPCR multiplex e 137% (p<0.05) no ddPCR específico para miR-124. Os resultados evidenciaram ainda níveis mais elevados de expressão de miR-124 no córtex perilesionado nas lesões mais extensas.
outubro 16, 2015, 15:0
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