Development of rapid tests for the detection of L-malic acid in wine using enzymes immobilized on paper via carbohydrate-binding modules EVALUATED

Detalhes: O ácido málico é um ácido orgânico que influencia as propriedades organoléticas do vinho, afetando a sua qualidade. Assim, é essencial a sua monitorização na indústria vinícola. O objetivo deste trabalho é desenvolver um teste colorimétrico em microfluídica de papel para detetar ácido málico em vinhos que seja adequado à indústria vinícola. O teste baseia-se na imobilização das enzimas L-malato desidrogenase (L-MDH) e aspartato aminotransferase (AST) juntamente com substratos colorimétricos em papel, que na presença do analito dão origem a um produto roxo. O teste é linear entre 5 e 150 mg/L, com um limite de deteção de 5.8 mg/L. Apesar de ser preciso e apresentar uma elevada repetibilidade, o dispositivo apresenta uma atividade reduzida e nos dispositivos de fluxo lateral foi observada uma heterogeneidade na cor obtida. Para contornar estas limitações, foram criadas proteínas de fusão, entre as enzimas utilizadas e um módulo de ligação a carbohidratos de C. thermocellum (CBM3), para aumentar a afinidade para a celulose. A AST-CBM3 foi clonada, produzida e purificada com sucesso, apresentando uma elevada afinidade para a celulose. O desempenho analítico do dispositivo não foi diretamente afetado pelo uso da AST-CBM3, contudo quando num tampão de imidazole a pH 7.5, a reação mostrou-se mais rápida e a estabilidade ao longo do tempo mais elevada. Procedeu-se à análise de amostras reais e os resultados obtidos foram semelhantes aos obtidos com um kit comercial, o que comprova que este dispositivo em papel é adequado para a deteção de ácido málico em vinhos.

Discussão: novembro 27, 2014, 16:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

AUTOR

Ana Catarina dos Reis Faria (ist176610)

ORIENTADOR

Duarte Miguel De França Teixeira dos Prazeres

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Associado