Dissertação
Quality Control of Phage Formulations during GMP Manufacturing EVALUATED
Com o desenvolvimento de estirpes bacterianas multirresistentes, há uma necessidade atual de explorar estratégias antibacterianas alternativas. Os fagos, vírus que infetam exclusivamente bactérias como organismos hospedeiros específicos, são uma abordagem potencialmente interessante. A terapia com fagos reapareceu e consiste na utilização de bacteriófagos como agente terapêutico para infeções humanas. Com os seus desenvolvimentos, é importante visar métodos rápidos e fiáveis de controlar a qualidade das formulações de fagos. O método mais utilizado para determinar o título de fago de uma amostra é o ensaio de placas, que é um método lento com problemas de reprodutibilidade. Esta tese de mestrado visa encontrar um método que possa diferenciar fagos individuais de agregados e quantificá-los, para ultrapassar as limitações anteriores e, assim, a técnica de espalhamento dinâmico da luz foi escolhida. Para este efeito, o fago T4 foi amplificado, e o seu lisado de fago foi purificado com cromatografia de troca iónica, que produziu amostras altamente concentradas. Estas amostras foram subsequentemente analisadas com DLS, e foram realizadas experiências de indução de agregação. No final, as amostras mostraram ter um baixo grau de pureza e a técnica DLS mostrou-se não ser adequada para amostras altamente complexas, tais como fagos com cauda. Em termos de trabalho futuro, o trabalho com DLS multi-ângulo com amostras altamente purificadas poderá proporcionar melhores resultados.
novembro 24, 2022, 14:0
Publicação
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Orientação
ORIENTADOR
Ana Margarida Nunes da Mata Pires de Azevedo
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Auxiliar