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Dissertação

Studying miR-34a mediated gene regulation during hepatic embryogenesis EVALUATED

Detalhes: Desde a embriogénese até a vida adulta, milhões de células emergem, diferenciam-se e morrem. Este fenómeno é controlado por mecanismos regulatórios, como microRNAs, que garantem uma correta expressão genética. A falhas destes, leva ao desenvolvimento de patologias embrionárias e pós-natais como doenças hepáticas. Anualmente, 2 milhões de mortes resultam de distúrbios hepáticos. Adicionalmente, várias doenças hepáticas estão, até hoje, sem cura. Contudo, muitos esforços estão a ser feitos para desenvolver tratamentos para ditas doenças. Este estudo usa microRNAs para regular a expressão de Notch2 e Hnf4α, genes essenciais durante a embriogénese hepática. A análise foi realizada em hepatoblastos de rato no dia embrionário 13.5, de forma a mimetizar o desenvolvimento hepático. Estas células foram transfectadas com miR-34a, um regulador de Notch2 e Hnf4α. Sete variantes de miR-34a, que diferem entre si por modificações químicas, foram testadas para ultrapassar limitações na transfecção e determinar que modificações levam a uma regulação mais eficiente. As variantes foram encapsuladas em nanopartículas lipídicas. A técnica RT-PCR foi usada para avaliar a eficiência desta regulação. Com base nos resultados obtidos, 48h foi estabelecido como sendo o melhor tempo de transfecção e regulação para as variantes de miR-34a. Foi ainda possível observar que entre as modificações testadas, uma fosforilação na extremidade 5’ e uma ligação fosforotioato em cada extremo da molécula levam a uma melhor eficiência quer de transfecção quer de regulação. Deste modo, estes resultados permitem dar um passo em frente nos tratamentos com ácidos nucleicos, principalmente no combate a doenças hepáticas.
Keywords: Desenvolvimento embrionário do fígado, miR-34a, nanopartículas lipídicas, Hnf4α, Notch2.

Discussão: dezembro 5, 2022, 9:30