Dissertação
Establishing an RNA-sequencing approach to analyse the migration of B cells in the chicken embryo EVALUATED
Os linfócitos B têm uma importância inquestionável no sistema imune. Em galinhas, os precursores das células B iniciam o seu desenvolvimento no baço e depois migram para a bursa de Fabricius, através do sangue, para se maturarem e diversificarem. No entanto, os mecanismos e sinais que regulam esta migração permanecem, em grande parte desconhecidos, pois a metodologia para isolar estes linfócitos em períodos tão iniciais é desafiadora. Neste trabalho, uma metodologia baseada em FACS e sequenciação de RNA foi estabelecida com vista a isolar as células B nos períodos e locais cruciais do seu desenvolvimento, iniciando-se no dia embrionário (ED) 12 e do baço, bursa e sangue. Estudo anteriores identificaram o mecanismo CXCR4/CXCL12 como envolvido mas não crítico na migração dos linfócitos B para a bursa. A análise dos dados de sequenciação de RNA realizada neste trabalho revelou sete mecanismos possivelmente envolvidos na migração de células B. Dois estão provavelmente implicados na regulação negativa, e os outros cinco na regulação positiva da migração celular. O recetor CXCR5 e seu ligando CXCL13 são propostos como um mecanismo necessário e suficiente para a migração de células B, com a sua expressão bastante acentuada no ED14 e 16 na bursa. Análises de enriquecimento de vias de sinalização revelaram que os sinais mais prevalentes envolvidos na migração de células B foram as interações citocina-recetor de citocina, MAPK e orientação de axónios. Em suma, neste trabalho foi estabelecido um protocolo para isolar linfócitos B e para realizar uma análise da sequenciação do RNA com êxito.
novembro 29, 2022, 10:0
Publicação
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Orientação
ORIENTADOR
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Auxiliar Convidado