Exploring hydrophobic interactions for the purification of the T4 bacteriophage: Phenyl and Phenyl Boronate Chromatography EVALUATED

Detalhes: O mundo está à beira de entrar mais uma vez numa era “pré-antibiótico”, associado ao aparecimento de bactérias resistentes a antibióticos. Terapia bacteriofágica apresenta-se como uma das mais promissoras ferramentas para combater este perigo. No entanto, não existe ainda um processo de purificação de bacteriófagos que permita a remoção total de impurezas do hospedeiro. Diversas cromatografias foram testadas sabendo que esta técnica deve estar no centro de uma solução. Cromatografia de fenil boronato (CFB) foi eficiente a adsorver bacteriófagos, via interações hidrófobas, resultando num rendimento de 54.5% e uma remoção de proteínas, dsDNA, e endotoxinas de 94.9%, 95.8% e 98.1%, respetivamente. Cromatografia de interação hidrófoba (CIH) foi utilizada com base nestes resultados. Diferentes concentrações de sulfato de amónio na fase de equilibração foram testadas, sendo que 0.75 M resultou no maior rendimento (93.0%) e uma remoção de proteínas, dsDNA, e endotoxinas de 98.3%, 88.3% e 93.3%, respetivamente. Um gradiente linear serviu como base para o desenvolvimento de gradientes com vários passos mais apropriados para a indústria. Com 0.75 M de sulfato de amónio na fase de equilibração e cinco passos de eluição, um rendimento de 70.2% foi obtido, com uma remoção de proteínas, dsDNA, e endotoxinas de 96.8%, 92.5% e 98.8%, respetivamente. CFB e CIH aparentam ser ferramentas inovadoras para a purificação de bacteriófagos. O que falta perceber é como estas operações funcionariam com outros bacteriófagos e como a CIH pode ser otimizada em termos de ligandos e seleção de sais.

Discussão: novembro 4, 2022, 9:30

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

AUTOR

André Trigo Moutinho Gomes (ist198470)

ORIENTADOR

Ana Margarida Nunes da Mata Pires de Azevedo

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar