Dissertação
Studies with Vibrio alginolyticus OmpK towards the development of a vaccine for aquacultured Solea senegalensis EVALUATED
A industria da aquacultura é uma industria em ascensão devido à redução das reservas de peixe no oceano. Um dos problemas na produção de peixe em grande escala é o aparecimento de infeções, como a vibrose, que afetam a produtividade dos tanques de aquacultura e forçam o uso em grande escala de antibióticos que podem depois afetar os consumidores. O principal objetivo deste estudo é explorar a possibilidade de usar a proteína OmpK de Vibrio alginolyticus como proteína imunogénica para ser usada na vacinação dos peixes de aquacultura contra as infeções por Vibrio. Inicialmente foram feitas análises bioinformáticas para investigar a conservação desta proteína e prever a ocorrência de segmentos imunogénicos na proteína. Os resultados obtidos indicam que a OmpK é uma proteína conservada e potencialmente imunogénica. Procedeu-se à amplificação por PCR do gene que codifica OmpK e à clonagem no plasmídeo pET23a+. O plasmídeo recombinado obtido foi usado para transformar E. coli BL21e os transformantes foram usados para a sobreexpressão de OmpK. A purificação da proteína foi feita por cromatografia de afinidade. Inicialmente a purificação de OmpK recombinante não teve êxito, mas experiências posteriores usando proteína recombinante OmpK desnaturada com ureia 8M permitiram a purificação da proteína, sugerindo que a His-tag se encontra escondida quando sobreexpressa em E. coli. Estão a ser produzidos batches de proteína purificada de modo a serem usadas em experiências de imunização para produzir um anticorpo a ser usado em futuras experiências.
novembro 27, 2017, 9:0
Publicação
Obra sujeita a Direitos de Autor
Orientação
