Dissertação
Minicircle production and delivery to human mesenchymal stem/stromal cells for angiogenesis stimulation EVALUATED
As células estaminais mesenquimais (MSC) têm atraído muita atenção na medicina regenerativa devido à sua utilidade como células de substituição, devido às suas propriedades únicas. O transplante de MSC associado à terapia angiogénica é uma estratégia promissora para o tratamento de doenças cardiovasculares. Embora as MSC produzam o factor de crescimento endotelial vascular (VEGF), envolvido na estimulação da angiogénese, a sua sobre-expressão pode melhorar as suas propriedades terapêuticas na regeneração cardíaca. Quanto à introdução de genes, a aplicação de sistemas não-virais é uma prioridade. Como alternativa ao plasmídeo convencional, minicírculos que codificam para VEGF-GFP foram produzidos pela Escherichia coli BW2P através da recombinação in vivo na fase exponencial que levou a eficiências de recombinação superiores a 90%. Em relação à purificação, os minicírculos representam aproximadamente 15% da amostra e a sua recuperação a partir das cromatografias de permuta aniónica e de interacção hidrofóbica foram, respectivamente, 50-67% e 40-46%, devendo ser melhoradas. As MSC transfectadas com minicírculos atingiram um máximo de 31±8% de células a expressar GFP, considerando os promotores CMV e mCMV+hEF1α-CpGfree, e não foi observada uma diferença significativa em comparação com pVAX-VEGF-GFP. No entanto, a maior sobrevivência das MSC com minicírculos e os resultados de ELISA mostraram que a concentração de VEGF foi pelo menos 1,3vezes superior do que nas MSC pVAX-VEGF-GFP, após 7dias de transfecção. Os promotores hEf1α e hEf1α-CpGfree mostraram baixos níveis de expressão. Este trabalho demonstrou que os minicírculos têm potencial para melhorar a eficácia terapêutica MSC no tratamento de doenças cardiovasculares através de angiogénese.
dezembro 2, 2014, 16:30
Publicação
Obra sujeita a Direitos de Autor
Orientação
CO-ORIENTADOR
Teresa Catarina Páscoa Madeira
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Colaborador Não Remunerado Docente
