Dissertação
Towards Fully Defined Culture Systems for Human Induced Pluripotent Stem Cell Expansion EVALUATED
A geração de células estaminais pluripotentes induzidas (iPS) alterou o paradigma tecnológico na área da biologia de células estaminais, sendo uma tecnologia que irá potencialmente aumentar no futuro a probabilidade de sucesso de terapias para doenças neurodegenerativas. O trabalho experimental desenvolvido no âmbito desta tese focou-se na análise da influência de diferentes condições de cultura, tanto usando feeder layers ou substratos feeder-free, tais como a composição do meio de cultura e da tensão de oxigénio, de forma a obter um sistema de cultura sem recurso ao uso de soro ou substâncias xenogénicas. O crescimento celular foi analizado para cada condição e a manutenção da pluripotência avaliada pela análise de marcadores intra- e extracelular através de imunocitoquímica e citometria de fluxo. No final do trabalho determinou-se que o sistema mais promissor é constituído por uma matriz de Matrigel? com meio TeSR?2, sob 20% de oxigénio, que permitiu um elevado número de divisões celulares combinado com a expressão dos marcadores de pluripotência extracelulares TRA-1-60, TRA-1-81, SSEA-3 e SSEA-4, assim como o marcador intracelular Sox2. Ao mesmo tempo, verificou-se existirem ainda mais de 95% de células dentro da população que expressam Oct4 e Nanog. Por fim, usando Blebistatina como inibidor de miosina II não muscular e usando uma densidade celular de 50,000 células/cm2 verificou-se que é possível fazer a dissociação de agregados de células hiPS sem perda da sua viabilidade, o que é promissor em termos de aumento de escala da expansão destas células pois permite uma inoculação celular mais homogénea de biorreactores.
julho 20, 2011, 11:0
Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente
Orientação
ORIENTADOR
Maria Margarida Fonseca Rodrigues Diogo
Biomateriais, Nanotecnologia e Medicina Regenerativa (CC. 3313)