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Dissertação

Novel aqueous two-phase systems for the purification of antibodies EVALUATED

Detalhes: A purificação de proteínas é um campo de enorme interesse científico e económico no sector da saúde. Em particular, os anticorpos monoclonais representam um quarto dos produtos biofarmacêuticos que se encontram em ensaios clínicos, sendo portanto ideais para estudos de purificação de proteínas devido à sua relevância enquanto agentes terapêuticos. Sistemas de duas fases aquosas baseados em polietileno glicol (PEG) e poliacrilato de sódio (NaPAA) foram testados como uma alternativa economicamente viável aos tradicionais sistemas PEG/dextrano. A partição de proteínas revelou-se dependente de várias interacções, nomeadamente interacções electrostáticas, hidrofóbicas e de exclusão molecular. Para melhorar a rapidez do processo, foi testada a eficácia de uma plataforma de elevado desempenho. Esta, baseou-se em microplacas de 96-poços, as quais permitem testar simultaneamente diferentes parâmetros e requerem quantidades reduzidas de matérias-primas. Todavia, a variabilidade dos resultados experimentais ultrapassou o limite pré-estabelecido, pelo que se usou a abordagem clássica, baseada em tubos de ensaio. O peso molecular do PEG teve um efeito significativo na partição do anticorpo. Para pesos moleculares inferiores a 3350 Da, observou-se um aumento no coeficiente de partição do anticorpo. Porém, uma diminuição foi observada para pesos moleculares superiores devido a efeitos de exclusão molecular. Também a adição de um sal neutro como o NaCl teve um efeito pronunciado na partição do anticorpo. Um aumento da força iónica devido a concentrações de NaCl mais elevadas favoreceu a recuperação do anticorpo na fase rica em PEG. Alterações no pH num intervalo entre 5 e 8 não tiveram efeito na partição do anticorpo.
Keywords: Anticorpos, Sistemas de duas fases aquosas, Polietileno glicol (PEG), Poliacrilato de sódio (NaPAA).

Discussão: dezembro 7, 2010, 16:0

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