Dissertação
Diversification and screening of PET hydrolases for increased activity EVALUATED
O plástico é um material que veio revolucionar a sociedade moderna. Porém, devido ao seu tempo de vida extenso e origens em combustíveis fósseis, é de máxima importância não só acelerar a sua degradação mas permitir reciclagem de modo a garantir economia circular. A degradação enzimática revelou ser uma boa estratégia. Sonnendecker et. al descobriram um enzima, PHL7 (Polyester Hydrolase Leipzig 7), capaz de degradar politereftalato de etileno (PET). Dr. Künze, utilizando o algoritmo PROSS, desenvolveu um enzima com atividade de degradação de PET promissora e com termo-estabilidade mais elevada que PHL7, o GK2, que apenas se diferencia de PHL7 em 24 resíduos. Seria interessante saber quais as contribuições individuais e em conjunto destes resíduos para a atividade e estabilização do enzima. Para tal, este projecto propôs-se a desenvolver e optimizar um protocolo que construa, expresse e analise uma biblioteca de mutantes num sistema de 24-poços. Para a sua produção, a técnica de restriction-free cloning e um sistema celular capaz de desacoplar a produção de biomassa à expressão da proteína mutante, enGenes eX -press V2, foram utilizados. Foi possível uma elevada produção de enzima, permitindo-nos utilizar directamente o sobrenadante celular para os ensaios enzimáticos, efectuados recorrendo-se a espectroscopia de impedância e ao método de gravimetria. Após a optimização do protocolo, uma nova experiência foi efectuada para analisar o papel de um loop no PHL7. Contudo, esta experiência revelou-se mal-sucedida, já que não foi possível produzir nenhuma colónia, abrindo espaço para novas optimizações.
dezembro 5, 2023, 9:0
Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente
Orientação
ORIENTADOR
Leonilde de Fátima Morais Moreira
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Associado
