Dissertação
Exploring the non-conventional yeast I. orientalis as a cell factory for the production of Itaconic acid EVALUATED
O presente trabalho foca-se na exploração de I.orientalis, uma espécie não-convencional de levedura como potencial produtor de ácido itacónico. Aqui verificamos indícios de que a resistência a ácidos carboxilicos exibida por esta espécie estará relacionados com a actividade das bombas de protões da membrana plasmática. Face a S.cerevisiae BY4741, I.orientalis tem actividade superior, quer face à toxicidade do ácido itacónico, quer em condições controlo.A acidificação intracelular está associada ao stress por ácidos carboxílicos, assim é possível que esta maior actividade das bombas de protões esteja subjacente à alta tolerância a ácidos carboxílicos em I.orientalis. Expressão heteróloga da enzima cis-aconitato descarboxilase de A.terreus em I.orientalis resultou em títulos de ácidos itacónico na gama dos 0.4 g L-1 em 2% glucose. O título obtido está entre os mais altos reportados até à data no que diz respeito à produção em levedura a priori de optimização. Para além disto verificámos ainda acumulação de ácido cítrico no caldo na ordem dos 23 g L-1, um sequestro de carbono altamente relevante. Com o objectivo de aumentar os títulos efectuou-se a sobreexpressão de genes nativos, aconitase citosólica, exportador putativode ácido itacónico MfsA e ainda do exportador mitocondrial de cis-aconitato MttA. A sobreexpressão da aconitase não aumentou a produção sendo que a sobreexpressão dos transportadores resultou num aumento de títulos. Obtivemos títulos de 1.1 e 1.3 g L-1 para MfsA e MttA, aumentos de 275 e 325% respectivamente. Para mais, resultou também num consumo completo do citrato.
novembro 24, 2017, 9:0
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