Dissertação
Flexible insect cell platforms for fast production of pseudotyped virus-like particles EVALUATED
A incorporação de proteínas de membrana na superfície de partículas semelhantes a vírus (VLPs) derivadas de vírus de envelope pode ser uma robusta estratégia para obter elevadas concentrações de proteínas de membrana. Este estudo demonstra o desenvolvimento de plataformas de células de inseto usando estratégias de integração sitio-específicas baseadas no sistema de troca de cassete mediada por recombinases para produção de proteínas de membrana ancoradas em Gag-VLPs. Previamente foram obtidos clones de células Sf9 e Hi5 integrando o gene da proteína Gag fundida com uma proteína repórter (iCherry) foram caracterizados de modo a identificar os que iriam co-expressar no mesmo local o recetor ligado à proteína G (GPCR), Adrb2. A secreção de Gag das populações para os clones isolados aumentou, demonstrando o valor da estratégia de desenvolvimento da linha celular aqui implementada. De modo a aumentar a produção de proteínas recombinantes em células de inseto, nós testámos diferentes estratégias de bioprocesso, nomeadamente: adaptação de células a condições hipotérmicas, adição de NaBu ou DMSO e a suplementação com nutrientes chave. A produção de proteína Gag usando baixas temperaturas de cultura foi bem-sucedida, 22ºC foi a temperatura onde houve maior produção de proteína. Comparando células adaptadas e não adaptadas, a adaptação foi crucial para um maior aumento na produção. A suplementação com DMSO, NaBu ou diferentes nutrientes também teve um efeito positivo na produção de proteína. O trabalho futuro irá focar-se na combinação destas estratégias de modo a ter um efeito sinergético e contribuir para aumentar ainda mais a produção de Gag-VLPs.
outubro 28, 2016, 14:0
Publicação
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Orientação
ORIENTADOR
Instituto de Biologia Experimental e Tecnológica (ITQB-Nova)
Doutora