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Dissertação

Production of outer membrane vesicles by the human pathogen Burkholderia cenocepacia: purification and preliminary characterization EVALUATED

Detalhes: A Fibrose quística (FQ) é uma doença autossómica recessiva resultante de mutações no gene responsável pelo regulador de condutância transmembranar de FQ, levando a que estes pacientes fiquem suscetíveis a infeções bacterianas. Um grupo de bactérias, complexo de Burkholderia cepacia (Bcc), é responsável por perigosas infeções em pacientes com FQ, devido à elevada resistência a antibióticos que estas bactérias exibem sendo necessário desenvolver estratégias alternativas para evitar estas infecções. As vesículas da membrana exterior (VME) têm sido utilizadas para o desenvolvimento de vacinas contra bactérias tais como Neisseria meningitidis e Burkholderia pseudomallei, estando já disponível no mercado uma vacina contra N. meningitidis. Neste estudo pretendia-se desenvolver um método escalável para a purificação de VME. Estas foram isoladas de B. cenocepacia K56-2 e submetidas a um passo purificação por cromatografia de exclusão molecular (CEM). A purificação de VME não atingiu os resultados desejados, pelo que foi desenvolvida uma estratégia alternativa que consistiu no uso de uma estirpe de B. cenocepacia AU1054. Com esta nova estirpe foi possível obter VME livres de contaminantes após o isolamento das vesículas, como confirmado por microscopia de transmissão electrónica (TEM). Estas VME foram posteriormente utilizadas em ensaios citotóxicos, realizados em células do epitélio bronquial humano 16HBE14o- e em larvas de Galleria melonella. As células 16HBE14o- sofreram uma redução na sobrevivência celular após exposição a VME derivadas de B. cenocepacia AU1054, no entanto este resultado não foi confirmado nos ensaios realizados com Galleria melonella, em que todas as lagartas injectadas sobreviveram ao ensaio.
Keywords: Vesículas da membrana exterior, Fibrose quística, purificação, Complexo de Burkholderia cepacia, cromatografia de exclusão molecular, citotoxicidade

Discussão: novembro 29, 2016, 11:0