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Dissertação

Integrated process for the production and purification of monoclonal antibodies from animal cell cultures EVALUATED

Detalhes: A plataforma atual de purificação de anticorpos monoclonais está centrada num passo de cromatografia de afinidade com proteína A, que consiste na operação unidade mais cara do processo de produção. Nasce assim a necessidade de se estabelecer uma plataforma alternativa de purificação que seja eficiente, robusta, rápida e económica. Uma das metodologias que tem vindo a ser explorada é a extração usando sistemas de duas fases aquosas (SDFA). Um SDFA é formado quando soluções aquosas de dois polímeros incompatíveis ou de um polímero e um sal são misturadas a acima de uma determinada concentração crítica. Este trabalho teve como objetivo estabelecer um sistema de dextrano e polietileno glicol (PEG) para a purificação de mAbs a partir de sobrenadantes de células de animais. Experiências de partição com IgG e FBS foram efetuadas em diversos sistemas que mimetizam os componentes iónicos de meios de cultura de células CHO. Um ligando de afinidade biespecifico, a LYTAG-Proteína A 1Z, foi utilizado para melhorar a recuperação de IgG na fase superior dos sistemas selecionados. A LYTAG tem uma elevada afinidade para o PEG, e a proteína A tem uma elevada afinidade para as moléculas de IgG, levando assim à formação de complexo do tipo PEG-LYTAG-proteína A-IgG. Um sistema dextrano 100 kDa/ PEG 6000 Da (8%/8%) apresentava 37% de recuperação de IgG que foi aumentada para 85% com a adição do ligando. A pureza aumentou de 19,6% para 33,3%. Estes sistemas mostram-se assim bastante promissores para uma estratégia de recuperação de IgG diretamente da cultura celular.
Keywords: Anticorpos monoclonais, Células CHO DP12, Processo de purificação, Extracção em sistemas de aquosas bifásico, Sistemas de dextrano/PEG, LYTAG-Proteína A 1z.

Discussão: setembro 26, 2016, 14:30