Dissertação
Development of an oral pDNA vaccine against Vibrio species EVALUATED
As vacinas são uma das principais ferramentas contra doenças infeciosas em humanos e animais. O acréscimo na produção em aquacultura originou um aumento de peixes em reservatórios, causando-lhes elevados níveis de stress e tornando-os mais vulneráveis a infeções, como a Vibriose. O objetivo deste projeto consiste em criar e desenvolver uma vacina de administração oral de ADN plasmídico contra espécies Vibrio. Plasmídeos puros foram produzidos em Escherichia coli com os seguintes rendimentos e respetivas concentrações: 67,4μg de pVAX eGFP, 7,31μg de pVAX OmpK e 23,52μg de fragmento pVAX OmpK por grama de peso seco celular e 526,5ng/μL, 56ng/μL e 175ng/μL. Chitosano e tripolifosfato foram utilizados para sintetizar diferentes nanopartículas, para efetuar uma posterior complexação com ADN. Estas foram caracterizadas pelo seu diâmetro hidrodinâmico médio, potencial zeta e índice de polidispersidade. Uma formulação de chitosano de cadeia longa (LC2, 5mL chitosano (3mg/mL), 2mL TPP (0,75mg/mL)) apresentou diâmetros pequenos, baixos valores do índice de polidispersidade e um potencial zeta positivo, selecionando-se para a complexação com o ADN. O chitosano de cadeia curta apresentou diâmetros e valores de índice de polidispersidade maiores, significando que alguma agregação ocorreu. A bioinformática previu novos epítopos imunogénicos entre as proteínas da membrana externa das bactérias Vibrio. As análises BLAST sugerem que a OmpK deve ser selecionada, prevendo que esta se encontre nas superfícies das membranas de muitas estirpes Vibrio. Na sequência OmpK, o péptido entre as posições 200 e 228 é o mais hidrofílico e flexível, contendo apenas uma região de cinco aminoácidos mais propensos à agregação.
outubro 8, 2020, 13:30
Publicação
Obra sujeita a Direitos de Autor
Orientação
