Dissertação
Development of a Micropatterned System to Study the Role of Protein Tethers in Lipid Membrane Organization EVALUATED
A membrana plasmática é uma estrutura celular complexa, constituída por fosfolípidos e proteínas, que desempenha uma variedade de funções biológicas essenciais. Estas funções estão associadas à formação de heterogeneidades laterais denominadas jangadas lipídicas. A membrana plasmática interage com o citoesqueleto, que por sua vez tem capacidade de organizar e definir as jangadas lipídicas. Pensa-se que as ancoragens do citoesqueleto à membrana celular, mediadas por lípidos como o PIP2, têm um forte impacto na distribuição lipídica; uma vez que, aparentemente, a membrana apresenta um comportamento crítico, o efeito destas adesões torna-se mais importante e acentuado. Este projecto teve como objectivo construir um sistema modelo para mimetizar as adesões citoesqueleto-membrana. Usando fotolitografia, construiu-se um micropadrão de avidina em substrato de vidro; depois, usando membranas suportadas formadas por liposomas contendo lípido biotinilado, pretendemos estudar o efeito da ligação avidina-biotina na separação de fases e organização de domínios. Os resultados obtidos revelaram que, apesar de a formação de membranas suportadas em vidro revestido com proteína não ter ocorrido usando lipossomas pequenos, lipossomas gigantes aderiram a superfícies revestidas de avidina e rebentaram para formar membranas suportadas após o choque osmótico. No entanto, estas vesículas foram incapazes de aderir à superfície padronizada com avidina, provavelmente devido a modificações de folding proteico aquando do processo de fabricação. Apesar deste sistema modelo estar por completar, a formação de membranas suportadas a partir de lipossomas gigantes em superfícies micropadronizadas com proteína é uma estratégia promissora para o estudo do papel das adesões membranares na formação de domínios lipídicos.
novembro 13, 2014, 16:0
Publicação
Obra sujeita a Direitos de Autor
Orientação
CO-ORIENTADOR
João Pedro Estrela Rodrigues Conde
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Catedrático