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Dissertação

Microfluidic Systems for Studies in Parkinson's Disease EVALUATED

Detalhes: Os dispositivos microfluídicos têm aplicações em investigação biológica, como o estudo de células individuais. Neste trabalho foi desenvolvido um dispositivo para estudos com Saccharomyces cerevisiae geneticamente modificadas, como modelo de Parkinson. O dispositivo em PDMS é constituído por um gerador de gradiente, com 3 entradas e 9 câmaras com ambiente controlado, compostas por armadilhas hidrodinâmicas para células. Inicialmente procedeu-se à calibração do gerador de gradiente, com FITC, obtendo um gradiente definido nas câmaras e optimização e estudo da eficiência do aprisionamento de células individuais (≈90%). A alpha-Sinucleína é uma proteína central na doença de Parkinson, que em condições patológicas agrega no citoplasma de células neuronais. As células utilizadas expressam alpha-sinucleína humana, em fusão com GFP sob a regulação de um promotor induzido por galactose. A expressão desta proteína foi estudada recorrendo a um gradiente de galactose, traduzido pelo aumento de fluorescência. Posteriormente usaram-se compostos químicos descritos como indutores e inibidores da formação de inclusões em levedura. Foi testado um gradiente de FeCl3 e com o aumento do agente de stresse, foi verificado um aumento de ≈70%, no número de células com inclusões da proteína. Pelo contrário, estimulando as células com um gradiente de ácido ascórbico, foi observada uma diminuição de ≈57% das células com inclusões. Concluindo, o dispositivo microfluídico permite o estudo de células individuais sob um ambiente controlado e o uso destas como modelo de patologias. É possível manter células vivas no dispositivo e monitorizar a cultura. Esta metodologia será usada para estudar as bases moleculares de sinucleínopatias.
Keywords: Alpha-sinucleína, Dispositivo microfluídico, Gerador de gradiente, Célula individual

Discussão: outubro 24, 2013, 14:0

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