Dissertação

Piwi proteins in small RNA-mediated regulation of gene expression: Biochemical, structural and functional studies Biochemical, structural and functional studies EVALUATED

Pequenos ARNs regulam a expressão genética, ao nível transcricional ou pós-transcricional, dirigindo a acção de proteínas Argonautas contra alvos específicos. Uma importante classe de Argonautas consiste na subfamília das proteínas Piwi, que recentemente se descobriu ligarem-se a um novo tipo de pequenos ARNs: os piwi-interacting RNAs (piRNAs). Entre outras características, estes apresentam um grupo 2?-O-metil na extremidade 3?, cuja função é ainda pouco entendida. De forma a esclarecer o modo de acção das proteínas Piwi e seus parceiros piRNAs, estudos bioquímicos e estruturais foram empreendidos sob dois projectos. Por um lado, pretendia-se avaliar a relevância da metilação dos piRNAs para a sua interacção com as proteínas Piwi. Nesse intuito, domínios PAZ de proteínas pertencentes às subfamílias Piwi e Argonauta foram expressos em bactérias e purificados com vista a ensaios de ligação em filtro e de cristalografia de proteínas. Por outro lado, tinha-se por objectivo investigar se, como outras Argonautas, as proteínas Piwi são capazes de silenciar genes por clivagem de ARNs mensageiros alvo. Nesse sentido, foram produzidos materiais destinados a ensaios de clivagem. Entre eles, incluem-se proteínas das subfamílias Piwi e Argonauta, assim como uma molécula de ADN molde, para produção de um ARN repórter, radioactivamente marcado, por transcrição in vitro.
Pequeno ARN, piRNA, Piwi, Argonauta, expressão de proteínas, cristalografia.

Dezembro 10, 2007, 16:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Ramesh Pillai

European Molecular Biology Laboratory, EMBL

Especialista

ORIENTADOR

Arsénio do Carmo Sales Mendes Fialho

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Associado