Piwi proteins in small RNA-mediated regulation of gene expression: Biochemical, structural and functional studies Biochemical, structural and functional studies EVALUATED

Detalhes: Pequenos ARNs regulam a expressão genética, ao nível transcricional ou pós-transcricional, dirigindo a acção de proteínas Argonautas contra alvos específicos. Uma importante classe de Argonautas consiste na subfamília das proteínas Piwi, que recentemente se descobriu ligarem-se a um novo tipo de pequenos ARNs: os piwi-interacting RNAs (piRNAs). Entre outras características, estes apresentam um grupo 2?-O-metil na extremidade 3?, cuja função é ainda pouco entendida. De forma a esclarecer o modo de acção das proteínas Piwi e seus parceiros piRNAs, estudos bioquímicos e estruturais foram empreendidos sob dois projectos. Por um lado, pretendia-se avaliar a relevância da metilação dos piRNAs para a sua interacção com as proteínas Piwi. Nesse intuito, domínios PAZ de proteínas pertencentes às subfamílias Piwi e Argonauta foram expressos em bactérias e purificados com vista a ensaios de ligação em filtro e de cristalografia de proteínas. Por outro lado, tinha-se por objectivo investigar se, como outras Argonautas, as proteínas Piwi são capazes de silenciar genes por clivagem de ARNs mensageiros alvo. Nesse sentido, foram produzidos materiais destinados a ensaios de clivagem. Entre eles, incluem-se proteínas das subfamílias Piwi e Argonauta, assim como uma molécula de ADN molde, para produção de um ARN repórter, radioactivamente marcado, por transcrição in vitro.

Discussão: dezembro 10, 2007, 16:0

Orientação

AUTOR

Elsa Alexandra Tavares da Rocha (ist150448)

CO-ORIENTADOR

Ramesh Pillai

European Molecular Biology Laboratory, EMBL

Especialista

ORIENTADOR

Arsénio do Carmo Sales Mendes Fialho

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Associado