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Dissertação

{en_GB=Design of HER2-specific virus-like particles: the next step in targeted therapy } {} EVALUATED

Detalhes: {pt=Recentemente, surgiram novas estratégias de diagnóstico e tratamento na investigação sobre o cancro. O recetor para o fator de crescimento epidérmico tipo 2 (HER2) quando expresso em excesso torna os casos de cancro extremamente agressivos e com baixo prognóstico de cura, sendo normalmente tratados com trastuzumab. Contudo, nem todos os doentes respondem a esta terapia. As partículas semelhantes a vírus (VLPs) surgem como promissoras nanoplataformas para serem usadas como sistemas de administração de medicamentos. Elas podem adquirir especificidade expressando, na sua superfície, uma molécula específica da célula alvo, aumentando a eficácia terapêutica. O objetivo desta tese foi o desenvolvimento e caracterização de uma VLP baseada no VIH-1 que contém na sua superfície um fragmento variável de cadeia simples (scFv) de um anticorpo anti-HER2. A linha celular de mamífero HEK-293T foi escolhida para produzir as VLPs por transfeção transitória. Foram realizados estudos in vitro para avaliar a presença da proteína de fusão e a sua ligação ao alvo HER2 bem como os efeitos citotóxicos das VLPs. Os resultados mostraram uma produção eficiente de VLPs baseadas no VIH-1 contendo na sua superfície a scFv de um anticorpo anti-HER2. Mais importante ainda, os resultados preliminares obtidos, mostraram ligação entre o recetor HER2 e a VLP destacando que manteve-se a especificidade do trastuzumab scFv quando expresso na superfície da VLP. Não foi detetada citotoxicidade nas células SK-BR-3 quando incubadas com as VLPs. Este trabalho pode iniciar novas abordagens nas terapias direcionadas para cancros que expressam em excesso o HER2 e sistemas de administração anti-HER2., en=In recent years, exciting new diagnosis and treatment strategies have emerged in the context of cancer research. Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 (HER2) positive cancers are extremely aggressive, associated with a poor prognosis and are most commonly treated with trastuzumab. However, not all patients respond to this therapy. Virus-like particles (VLPs) arise as promising nanoplatforms to be used as drug delivery systems. They can acquire specificity through the expression, on their surface, of a cell target-specific molecule of interest, increasing the therapeutic efficacy of a drug. The main goal of this thesis was the development and characterization of an HIV-1 based VLP containing on the surface a single chain variable fragment (scFv) of an anti-HER2 antibody. The mammalian HEK-293T cell line was chosen to produce the HIV-1 based VLPs by transient transfection. In vitro studies were done to assess the presence of the fusion protein, binding to the HER2 target and the cytotoxic effects of VLPs. Our results showed the efficient production of HIV-1 based VLPs containing on the surface a scFv of an anti-HER2 antibody. More importantly, the preliminary results obtained indicated binding between the receptor HER2 and engineered HIV-1 based VLP, highlighting that trastuzumab scFv when expressed on the VLP surface maintains its specificity to HER2. No cytotoxicity was detected after incubating the SK-BR-3 cells with the HIV-1 based VLPs produced. This work can be the kick-off for new approaches towards targeted therapies for HER2 overexpressing cancers and anti-HER2 delivery systems.}
Keywords: {pt=VLPs baseadas no VIH-1, Recetor Fator de Crescimento Epidérmico2, Terapia Direcionada, Sistema de Administração Terapêutica, VLPs específicas para o HER2, en=HIV-1 based Virus-like Particles, Human Epidermal Growth Factor Receptor 2, Target Therapy, Therapeutic Delivery System, HER2-specific Virus-like Particles}

Discussão: setembro 21, 2021, 14:30