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Dissertação

{en_GB=Bead – Based microfluidic system for RNA/DNA detection} {} EVALUATED

Detalhes: {pt=MicroRNAs (miRNAs) em circulação têm sido estudados como uma nova geração de biomarcardores para doenças cardiovasculares e que podem, potencialmente, ser usados para diagnóstico e prognóstico de doenças cardíacas. O desenvolvimento de um sistema microfluídico baseado em esferas porosas, que possa detectar miRNAS, apresenta um grande potencial para desenvolver um sistema de baixo-custo, rápido, sensível e portátil. Nesta tese, foi estudado um sistema microfluídico que usa como plataforma de imobilização esferas de agarose para a detecção de DNA/RNA e com possível aplicação aos miRNAs. Os canais foram fabricados em PDMS e selados contra uma membrana de PDMS. Várias plataformas de imobilização foram testadas. Sondas de DNA foram imobilizadas na superfície das esferas de agarose e a intensidade de fluorescência foi medida para as diferentes plataformas. Provou-se que, com o uso das esferas, o sinal de imobilização aumenta 200 vezes em relação à imobilização feita num canal simples. O protocolo foi optimizado, tendo-se alterado fluxos de imobilização, dimensões do canal a usar e escolhido o melhor método de bloqueio. Utilizou-se ainda como método de deteção quimioluminescência e colorimetria sendo que o limite de deteção encontrado foi de 10pM e 100pM, respectivamente. Testou-se ainda a aplicabilidade do sistema ao uso de matrizes biológicas (soro humano e soro fetal de vitela) verificando-se que foi possível a detecção de sinal. , en=Circulating MicroRNAS (miRNAS) have been studied as a new generation of biomarkers for cardiovascular diseases that can be used for diagnosis and prognosis of a wide range of cardiovascular disorders. The development of a porous bead based microfluidic system that is able to detect miRNA promises great potential for the development of a low-cost, fast, sensitive and portable diagnostic system. In this work, a microfluidic system that uses as immobilization platform agarose beads to detect DNA/RNA was studied, with possible application for miRNAs. PDMS microchannel were sealed against a PDMS membrane. Several immobilization platforms were tested. A DNA probe was immobilized onto the agarose beads surface and fluorescence intensity was measured. Using the beads fluorescence intensity signal was enhanced 200-fold when compared with an immobilization performed in a bare channel. Protocol optimizations for the flow rate, channel dimension and blocking method were performed. Chemiluminescence and colorimetric detection methods were also tested with a limit of detection 10pM and 100pM, respectively. Biological matrixes were also used during experiments (human serum and fetal calf serum) and it was verified that it was possible to detect signal. }
Keywords: {pt=Sistema microfluídico, esferas de agarose, hibridação de ácidos nucleicos, doenças cardiovasculares., en=Microfluidic system, agarose beads, nucleic acid hybridization, cardiovascular diseases.}

Discussão: novembro 25, 2015, 9:0