Dissertação
{en_GB=Multiplex detection of cell surface markers using Surface Plasmon Resonance Imaging } {} EVALUATED
{pt=Surface Plasmon Resonance (SPR) e ́ uma técnica consolidada para a detecção de ligações moleculares. Recentemente, novos setups instrumentais, transformaram o SPR num me ́todo de detecção da ligação específica ao sensor em tempo real e sem marcação . Neste trabalho, Surface Plasmon Resonance Imaging (SPRi) foi usado para investigar a viabilidade de um sensor multiplex na detecção simultanêa 44 antígenos da membrana celular. Curvas obtidas para as celulas cancerıgenas, mostraram uma variedade de respostas para cada um dos antigenos alvo. No que se refere a ́s medições efectuadas com ce ́lulas sangu ́ıneas, células T e Granulócitos foram facilmente identificadas. Medições efectuadas em sangue com adição de células cancerigenas, mostraram que com base na resposta de antígenos e ́ possível detectar estas ce ́lulas em amostras complexas. Para explorar os factores por detra ́s dos sinais de SPR detectados, uma comparac ̧a ̃o com Citometria de Fluxo, mostrou uma relação entre a intensidade da resposta e o nu ́mero de antígenos na membrana celular. Tambe ́m o estudo relativo ao efeito do nu ́mero de ce ́lulas e a sua àrea no sinal, demonstrou uma proporcionalidade com a intensidade. Adicionalmente, a ana ́lise de imagem de ce ́lulas individuais, indica que este me ́todo pode ser usado para monitorizar uma u ́nica ce ́lula. Em conclusão, neste trabalho foi ilustrado que a te ́cnica de SPRi permite observar simultânemente a ligac ̧ão celular a multíplos marcadores e sugere que a quantificac ̧a ̃o pode ser obtida., en=Surface Plasmon Resonance (SPR) is an established technique for detection of molecular binding. More recently, new experimental set ups transformed SPR in a label-free and real-time detector of specific cell binding to an immobilized ligand. In this work, Surface Plasmon Resonance Imaging (SPRi) was employed to investigate the feasibility of a multiplex sensor to detect simultaneously 44 different cell surface antigens. For cancer cells, SPR curves showed a variety of responses to each one of the targeted antigens, proving the ability of this sensor to characterize multiple cell surface molecules. Regarding the peripheral blood cell measurements, frequent leukocytes populations such as T-cells and Granulocytes were easily identified. Furthermore, measurements performed on samples spiked with cancer cells showed that based on specific cancer antigens response, cancer detection in a complex sample is possible. Exploring the factors behind the detected SPR signals, a comparison with flow cytometry showed a relation between the response intensity and the number of antigens on the cell surface. A study of the number of cells binding to the sensor and the cell area effect on the signal also demonstrated a proportional relation with intensity. Also, single-cell image based analysis indicated that individual cell binding can be detected. In conclusion, here it was illustrated that SPRi allows the simultaneous observation of cell binding to multiple markers and suggests that antigen quantification can be achieved.}
dezembro 1, 2014, 14:0
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