{pt=Isolation and ex-vivo expansion of endothelial progenitor cells from the umbilical cord blood} {} EVALUATED

Detalhes: {pt=O objectivo desta tese foi maximizar a exploração do cordão umbilical, como fonte promissória de células estaminais com aplicação de Medicina Regenerativa. O efeito da criopreservação a curto-prazo de células estaminais mesenquimais da matriz do cordão umbilical foi estudado com particular interesse. UCM MSC isoladas frescas e criopreservadas demonstraram um potencial de expansão e de diferenciação em multilinhagens semelhante, permitindo a produção e comercialização de um produto off-the-shelf de células estaminais mesenquimais para terapia celular. Por outro lado, o sangue do cordão umbilical é rico em células estaminais hematopóieticas (HSC) e em células progenitoras endoteliais (EPC) , que partilham alguns antigénios de superfície. O potencial vascular de células CD34+ enriquecidas cultivadas ex-vivo num sistema de co-cultura com células estaminais mesenquimais derivadas da medula óssea (BM) foi avaliado. De modo a melhorar o potencial vascular, foi estudado e quantificado o efeito de diferentes estímulos de cultura em células UCB CD34+ enriquecidas: tensões de oxigénio, shear stress e estimulação com o factor pro-angiogénico VEGF. Um aumento significativo no potencial vascular foi obtido quando as células foram cultivadas com VEGF (10-50 ng/mL), a 2% O2, sob condições de agitação mecânica (75 rpm. aproximadamente 2.5 dyn/cm2), assim como pelo aumento da expressão de CD31, CD105 e CD146 e pelo maior número de tubos, conexões e comprimento tubular, durante o tempo de cultura, obtidos num ensaio funcional de formação de tubos, optimizado no âmbito desta tese. , en=The aim of this thesis was to maximize the exploitation of the umbilical cord (UC) as a promising stem cell source to be used in Regenerative Medicine applications. Particular interest was addressed to the effect of short-term cryopreservation on a specific cell subset - Umbilical Cord Matrix Mesenchymal Stem cells (UCM MSC), a potential alternative to bone marrow (BM) MSC, which have been extensively tested in clinical trials to treat immune and inflammatory diseases. Both freshly-isolated and cryopreserved UCM MSC showed comparable expansion and multilineage differentiation potential, which would allow the production and commercialization of an off-the-shelf MSC product for cell therapy. The vasculogenic potential of ex-vivo cultured UCB CD34+-enriched cells in a co-culture system with bone marrow (BM) derived MSC was evaluated herein. To further improve cell vasculogenic potential, it was studied the effect of different culture stimuli on UCB CD34+-enriched cell culture: oxygen tensions, shear stress and stimulation with pro-angiogenic factor VEGF. Significant increase in vasculogenic potential was obtained by culturing cells with VEGF (10-50 ng/mL) and under 2% O2, and mechanically stirred conditions (75 rpm; approximately 2.5 dyn/cm2) as assessed by the increase in the expression of CD31, CD105 and CD146, as well as the higher number of tubes, connections and length during time in culture, using a functional angiogenesis tube formation assay, optimized within the frame of this thesis. }

Discussão: dezembro 3, 2012, 11:30

Orientação

AUTOR

Marta Monteiro Silva Carvalho (ist162838)

CO-ORIENTADOR

Joaquim Manuel Sampaio Cabral

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedrático

ORIENTADOR

Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar