Dissertação

{en_GB=Development of tools to study human hair follicle biology in vitro - focus on hair follicle stem cells and their potential application in Vitiligo therapy} {} EVALUATED

{pt=O estudo da dinâmica do folículo piloso (FP) é um tema chave na procura de tratamentos eficazes para doenças de pele, como Vitiligo. Particularmente, o ciclo do FP e as células estaminais da pele constituem uma área de interesse pois estas células têm um papel fundamental nesse evento. A maioria dos estudos nesta área foram realizados em animais, logo os seus resultados não podem ser diretamente transpostos para a espécie humana. A presente dissertação tem como objetivo contribuir para o aumento de conhecimento nesta área, através do desenvolvimento de ferramentas para estudar a biologia do FP humano. Nomeadamente, foi desenvolvida com sucesso uma ferramenta para quantificação do ciclo celular através de microscopia, usando células HCT-116 expostas a 5-Ethynyl-2’-deoxyuridine (EdU), cujo sinal foi medido através do software CellProfiler. Estimaram-se durações de 6/7h, 4/5h e 4/5h para as fases S, G1 e G2 respetivamente. Além disso, foi desenvolvido um método para analisar as dinâmicas do FP humano, onde as células EdU positivas foram quantificadas em diversas regiões. Como era esperado, a região do bulbo apresentou o maior numero de células EdU positivas, apesar de também se ter documentado replicação na bainha externa. Por fim, o isolamento das células estaminais foi iniciado. O protocolo para a obtenção da suspensão de células do FP foi estabelecido após um processo de otimização, concluindo-se que o meio de cultura mais adequado é o CnT-07. As ferramentas desenvolvidas nesta dissertação poderão ser usadas no futuro para implementar terapias celulares eficazes em pacientes com Vitiligo., en=The study of human hair follicle (HF) dynamics is a key point to find more effective treatments for skin disorders such as Vitiligo. Human HF cycle and skin stem cells are a particularly interesting field, since HFs cycle continuously and stem cells have a crucial role in this phenomenon. Most of the studies addressing HF dynamics were performed in animals, so these results cannot be directly translated to humans. The present master thesis aims to contributing to fill-in this gap through the development of tools to study human HF biology. In this context, a tool for cell cycle quantification using microscopy was successfully developed using HCT-116 cells exposed to 5-Ethynyl-2’-deoxyuridine (EdU), whose signal was measured using CellProfiler software. S-phase was estimated to last 6/7h, G1-phase 4/5h and G2-phase 4/5h. Additionally, a method for analyzing human HF dynamics was established and EdU-positive cells were quantified in diverse HF regions. As expected, the bulb region showed the highest labeling index, but replication in outer root sheath cells was also documented and quantified. Lastly, the initial steps to obtain isolated HF stem cells were also performed. The protocol for obtaining HF epithelial cell suspensions from human biopsies was established after an optimization process, with CnT-07 medium proving appropriate for culture of these cells. The tools developed in this master thesis will be used in the future to pursue our aim of implementing cell therapies for patients suffering from Vitiligo.}
{pt=Células estaminais da pele, Ciclo celular, Folículo piloso, Proliferação, Microscopia, en=Skin stem cells, Cell cycle, Hair follicle, Proliferation, Microscopy}

Dezembro 11, 2017, 9:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

João António Augusto Ferreira

Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Professor Associado

ORIENTADOR

Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar