Dissertação

{en_GB=Cloning of the Stromal Cell-Derived Factor 1 (SDF1) Gene into Plasmid Vectors for Minicircle Generation and Protein Expression} {} CONFIRMED

{pt=As doenças cardiovasculares podem ser potencialmente tratadas por transplante de células estaminais mesenquimais geneticamente modificadas. Por exemplo, a sobre-expressão do factor derivado de células do estroma (SDF1), uma proteína que tem um papel significativo no retorno de células-tronco e na reparação de tecidos após uma lesão, é esperada para melhorar os efeitos terapêuticos das células estaminais mesenquimais transplantadas. Esta tese está focada na clonagem do gene SDF1α em plasmídeos com o objetivo de gerar minicírculos para transfecção em células estaminais mesenquimais. Adicionalmente, foram também contruídos outros plasmídeos para produção e purificação de SDF1. A inserção contendo SDF1 foi concebida com diferentes funcionalidades, nomeadamente a produção da proteína com a cauda de histidina, permitindo a sua purificação, ou a criação de um plasmídeo parental pronto para acomodar qualquer transgene. Um plasmídeo parental foi construído com sucesso e transformado na estirpe de E. coli BW2P, que produziu minicírculos (aprox. 500 pb) que codificam SDF1α após indução da recombinação com L-arabinose. , en=Cardiovascular diseases can be potentially treated by transplantation of genetically modified mesenchymal stem cells. For example, over-expression of the stromal cell-derived factor (SDF1), a protein which has a significant role in stem cell homing and in tissue repair after an injury, is expected to improve the therapeutical effects of the transplanted MSC. This thesis is focused in the cloning of the SDF1α gene into plasmid vectors with the goal of generating minicircles for MSC transfection. Additionally, plasmid vectors were also constructed so that they could be used as well for the lab-based production and purification of SDF1α. The sDF1a-containing insert was designed so it could serve different purposes, namely the production of the protein with the histidine tag to allow its purification or the creation of a general parental plasmid backbone ready to accommodate any transgene. A parental plasmid was successfully constructed and transformed into a BW2P Escherichia coli strain, which yielded SDF1α encoding minicircles (approx. 500 bp) upon L-arabinose induced recombination. }
{pt=doenças cardiovasculares, minicírculos, SDF1α, en=cardiovascular diseases, minicircles, SDF1α}

Junho 23, 2016, 11:0

Orientação

ORIENTADOR

Duarte Miguel De França Teixeira dos Prazeres

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedrático