Dissertação
NMR structural studies on protein-peptide interactions - The WW domain-Smad pair. EVALUATED
As interações entre as proteínas Smad e Nedd4.2 participam em muitas vias de sinalização celular, nomeadamente a TGF beta, que controlam uma grande variedade de processos celulares importantes, entre os quais a proliferação celular. Com o trabalho aqui apresentado pretendeu-se estudar as interacções entre os domínios WW, da proteína Nedd4.2, com diferentes proteínas Smad, fosforiladas e não fosforiladas, usando como modelo as proteinas Smad2 ou Smad3. Primeiro foi mapeada a zona de interacção, utilizando a experiência quantitativa 1H-15N HSQC para determinar qual a proteína Smad que teve a maior afinidade para um domínio WW. A partir da análise dos resultados determinou-se que os domínios WW2 e WW3 mostravam-se como os mais fortes candidatos, juntamente com as Smad2/3 fosforiladas e smad7. Na sequência destes resultados procurou-se determinar a estrutura do domínio WW3 com Smad3 alcançando-se uma estrutura quase terminada, que pôde reportar algumas informações sobre as suas funções biológicas, entre as quais: a sequência PPPxY, em proteínas Smad é fundamental para a interacção, fosforilação antes desta sequência (N-terminal) é uma importante modificação pós-translacional e alguns aminoácidos adjacentes ao motivo PPPxY (por exemplo, ácido glutâmico e aspártico) são importantes para dar especificidade ás interacções, possivelmente formando um gancho na região C-terminal da sequência PPPxY. A estrutura do complexo Smad3-WW3 foi determinada, através de RMN, com 70,2% dos resíduos nas regiões mais favorecidas e 20,6% em regiões permitidas adicionalmente, no gráfico de Ramachandran.
janeiro 21, 2011, 10:30
Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente
Orientação
ORIENTADOR
Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)
Professor Associado