Dissertação
Screening of Lactic Acid Bacteria strains for biopharmaceutical-grade plasmid and recombinant protein production EVALUATED
Estudaram-se sete estirpes de Lactococci e Lactobacilli para encontrar um candidato mais eficiente na replicação de DNA plasmídico (pDNA) exógeno, obtendo um maior rendimento, qualidade e menor taxa de degradação, melhorando os resultados previamente obtidos em Lactococcus lactis subsp. lactis LMG19460. Da análise das melhores condições de crescimento – temperatura (30º-43ºC), meio de cultura (MRS, M17) e agitação (0, 100 rpm) concluiu-se que MRS é o meio preferencial, excepto para Lactococcus lactis subsp. cremoris que cresce melhor em M17. Lactobacillus plantarum CCUG61730 é a estirpe mais resistente à temperatura, o que pode ser relevante já que muitos sistemas de edição de genoma usam estratégias baseadas no aumento da temperatura. O perfil da susceptibilidade a antibióticos demonstrou uma elevada resistência (>2000 µg/mL) das estirpes a neomicina, apramicina e a spectinomicina, excepto nas duas estirpes L. cremoris, nas quais a resistência foi significativamente menor (200-500 µg/mL). A eritromicina e o cloranfenicol mostraram valores de concentração inibitória mínima (MIC) particularmente baixos, tornando-os apropriados como marcadores de seleção. A viabilidade da transformação por eletroporação foi realizada para avaliar qual a estirpe com o maior rendimento e melhor qualidade de pDNA produzido. A transformação foi positiva para Lactococcus lactis subsp. cremoris MG1363, que obteve concentrações mais elevadas de pDNA quando comparada à estirpe referência. Este trabalho sugere a existência que uma estirpe mais adequada, e estudos adicionais podem levar à optimização de um protocolo de expressão genética eficiente, com uma ampla gama de aplicações nos campos da bioengenharia e terapia genética.
dezembro 13, 2019, 10:30
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